血液腫瘤骨髓微環(huán)境中纖維連接蛋白介導的化療耐藥模型的建立.pdf

1、目的：
　　 1.骨髓基質細胞（Bone Marrow Stromal cells，BMSCs）的分離及鑒定。
　　 2.檢測骨髓基質細胞是否表達纖維連接蛋白（Fibronectin,Fn）。
　　 3.模擬體內腫瘤細胞與骨髓基質中纖維連接蛋白接觸模型，驗證纖維連接蛋白是否介導了血液腫瘤微小殘留病灶的產(chǎn)生，即腫瘤耐藥。
　　 方法：
　　 1.收集血液科非惡性腫瘤患者骨髓液標本，梯度密度離心后，通

2、過貼壁法培養(yǎng)骨髓基質細胞。直接在顯微鏡下觀察分離培養(yǎng)的BMSCs細胞形態(tài)，應用流式細胞儀檢測BMSCs的細胞標志。
　　 2.細胞免疫熒光法檢測BMSCs表達Fn的表達情況。
　　 3.將包被有纖維連接蛋白的孔板與K562細胞共培養(yǎng)，MSCs細胞與K562細胞共培養(yǎng)，分別與伊馬替尼、柔紅霉素作用，然后通過流式細胞儀檢測K562細胞周期阻滯和細胞凋亡情況。
　　 結果：
　　 1.分離培養(yǎng)的BMSCs表面標

3、志：CD44、CD105表達陽性（PE 標記）；CD19、CD34和CD45表達陰性（FITC 標記）。
　　 2.MSCs細胞胞漿內表達Fn，且可以分泌Fn。
　　 3.Fn 誘導K562細胞發(fā)生G1 期阻滯，凋亡率降低。
　　 結論：
　　 1.分離培養(yǎng)了BMSCs 可以用于建立Fn 介導的粘附耐藥模型。分離培養(yǎng)的BMSCs分子標記與國際相關研究一致，可用于后期研究。
　　 2.BMSCs細胞