人食管鱗癌耐藥模型的建立和JP抗耐藥腫瘤作用研究.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheestablishmentofdrugresistancehumanesophagealsquamouscarcinomamodelsandthestudiesonantidrug—resistanceactivitiesandmechanismsofactionofByLiubinGuoSupervisor：Asso

2、cProfCongWangMicrobialandBiochemicalPharmacySchooIofPharmaceuticalScienceApril，2014一，摘要腫瘤多藥耐藥嚴(yán)重影響化療效果，甚至導(dǎo)致化療失敗，所以對(duì)于耐藥機(jī)制及克服策略的研究尤為重要。本課題第一部分通過(guò)建立人食管鱗癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株及對(duì)應(yīng)的體內(nèi)耐藥模型，初步探討食管鱗癌紫杉醇耐藥的耐藥機(jī)制。第二部分利用第一部分建立的耐藥模型，研究新型抗腫瘤化合物jP的抗耐藥

3、腫瘤作用及其機(jī)制。第一部分：人食管鱗癌體內(nèi)外耐藥模型的建立本部分采用高濃度間歇誘導(dǎo)結(jié)合時(shí)間遞增的方法建立了人食管鱗癌紫杉醇耐藥細(xì)胞模型，采用皮下移植的方法建立了對(duì)應(yīng)的體內(nèi)裸鼠移植瘤耐藥模型，并探討了兩者的生物學(xué)特性及耐藥機(jī)制。方法：以紫杉醇(Paclitaxel，PTX)為誘導(dǎo)藥物，人食管鱗癌ECl09細(xì)胞為親本細(xì)胞，應(yīng)用高劑量間歇誘導(dǎo)結(jié)合時(shí)間遞增的方法，歷時(shí)6個(gè)月時(shí)間，建立了人食管鱗癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株ECl09／Taxol。采用四甲基

4、偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)耐藥細(xì)胞對(duì)紫杉醇、5氟尿嘧啶、表阿霉素、順鉑的耐藥性；連續(xù)七個(gè)月監(jiān)測(cè)耐藥細(xì)胞的耐藥穩(wěn)定性：倒置顯微鏡及熒光顯微鏡觀察紫杉醇誘導(dǎo)前后細(xì)胞和細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化；AnnexinV／PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；對(duì)比ECl09與耐藥細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線及倍增時(shí)間：平板克隆實(shí)驗(yàn)測(cè)定親本細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的克隆形成能力；流式細(xì)胞術(shù)對(duì)比分析親本細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的周期分布情況：Westernblot分析產(chǎn)生耐藥前后細(xì)胞內(nèi)Bcl2、Bax、Pro

5、easpase3、PgP蛋白的表達(dá)變化情況：耐藥細(xì)胞羅丹明123(Rhl23)攝入／排出功能的檢測(cè)；利用體外耐藥模型，采用皮下移植法建立裸鼠移植瘤體內(nèi)耐藥模型，并對(duì)其耐藥性進(jìn)行鑒定。結(jié)果：耐藥細(xì)胞株ECl09廠raXol對(duì)紫杉醇的耐藥指數(shù)(RJ)為67157，且耐藥性穩(wěn)定，同時(shí)對(duì)未接觸過(guò)的5氟尿嘧啶、順鉑、表阿霉素交叉耐藥。ECl09廠raX01細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，體積偏小，常趨于群集性生長(zhǎng)，細(xì)胞核大而圓，結(jié)構(gòu)完整，染色均勻。耐藥細(xì)胞的自然