齊多夫定細(xì)胞內(nèi)磷酸化過程的動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的:在細(xì)胞培養(yǎng)體系中研究細(xì)胞內(nèi)核苷類藥物磷酸化的動(dòng)力學(xué)過程，以期對(duì)細(xì)胞內(nèi)藥物活性成分濃度變化情況有更為直接的理解。在健康人中給藥，探究血漿內(nèi)原藥濃度與單個(gè)核細(xì)胞中原藥及磷酸化產(chǎn)物濃度的變化規(guī)律及磷酸化動(dòng)力學(xué)過程，為核苷類藥物的臨床用藥提供參考信息。
　　方法:①建立化學(xué)合成齊多夫定一磷酸、二磷酸化物及三磷酸化物的方法，并用制備液相色譜方法分離純化。②建立LC-MS/MS測(cè)定血漿內(nèi)AZT及細(xì)胞內(nèi)AZT、AZT-MP、AZT-DP和

2、AZT-TP濃度的方法。③利用cck-8法考察齊多夫定對(duì)Molt-4和HUVCEs的細(xì)胞毒性作用，并進(jìn)行Molt-4及HUVCEs細(xì)胞培養(yǎng)體系中齊多夫定細(xì)胞內(nèi)磷酸化過程的動(dòng)力學(xué)研究。④健康志愿者單次給藥600 mg，用Ficoll密度梯度離心法分離血漿及外周血單個(gè)核細(xì)胞，測(cè)定給藥后不同時(shí)間受試者血漿及單核細(xì)胞內(nèi)齊多夫定及其磷酸化代謝物的濃度，用DAS2.0軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，研究齊多夫定及其磷酸化代謝物在血漿及單個(gè)核細(xì)胞中的動(dòng)力學(xué)過程。

3、
　　結(jié)果:①利用化學(xué)合成法成功合成齊多夫定一、二、三磷酸化物。②經(jīng)方法學(xué)考察，本研究中建立的測(cè)定細(xì)胞中AZT、AZT-MP、AZT-DP及AZT-TP濃度的LC-MS/MS法符合相關(guān)指導(dǎo)原則對(duì)生物樣本測(cè)試方法的要求。③細(xì)胞培養(yǎng)體系中磷酸化產(chǎn)物的生成主要是以一磷酸化物為主，二磷酸及三磷酸化物的細(xì)胞內(nèi)濃度遠(yuǎn)低于一磷酸化物。④人體試驗(yàn)中，血漿中齊多夫定均以原型存在，細(xì)胞內(nèi)磷酸化產(chǎn)物以一磷酸化物為主，二磷酸及三磷酸化物的濃度很低，與體外

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致;依據(jù)血漿與細(xì)胞內(nèi)齊多夫定濃度計(jì)算所得的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，以及細(xì)胞內(nèi)不同磷酸化產(chǎn)物之間的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在差異。血漿內(nèi)齊多夫定的Tmax為0.583 h，t1/2為2.022 h;細(xì)胞內(nèi)齊多夫定的Tmax為1.083 h，t1/2為2.493 h;細(xì)胞內(nèi)齊多夫定一磷酸化物的Tmax為1.5 h，t1/2為13.428 h;細(xì)胞內(nèi)齊多夫定二磷酸化物的Tmax為1.417 h，t1/2為8.285 h;細(xì)胞內(nèi)齊多夫定三磷酸化物的Tmax為