2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討清開靈注射液對人食管癌 Ec-109細胞生長的影響,及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在誘導Ec-109細胞凋亡中的作用和相關(guān)分子機制。
  方法:
  1、四氮噻唑藍法(MTT法)檢測清開靈注射液對人食管癌Ec-109細胞增殖活性的影響:用不同劑量的清開靈注射液(清開靈注射液的劑量用完全培養(yǎng)基稀釋倍數(shù)來表示,清開靈低劑量為1/100;清開靈中劑量為1/75;清開靈高劑量為1/50)分別作用于Ec-109細胞不同的時間長度(

2、包括12h、24h、36h、48h),并且設(shè)立陰性對照組(用等體積的完全培養(yǎng)基處理細胞)和陽性對照組(5氟尿嘧啶,用藥濃度為500μg/ml),通過觀察各組細胞形態(tài)學變化和計算細胞增殖抑制率等,比較分析清開靈注射液對人食管癌Ec-109細胞生存率的時效和量效關(guān)系。
  2、免疫熒光染色法檢測清開靈注射液作用于人食管癌Ec-109細胞后細胞凋亡狀況:細胞貼壁后加入正常培養(yǎng)基(陰性對照組)和同體積含1/100、1/75的清開靈注射液的

3、培養(yǎng)基(清開靈用藥組)處理細胞24h和48h,AO/EB染色后在熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡狀況。
  3、流式細胞分析技術(shù)檢測細胞凋亡率和細胞生長周期:細胞貼壁后加入正常培養(yǎng)基(陰性對照組)和同體積含1/100、1/75的清開靈注射液的培養(yǎng)基(清開靈用藥組)處理細胞24h和48h,用流式細胞分析技術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡率。
  4、免疫印跡法(Western Blot)對細胞內(nèi)相關(guān)蛋白表達水平的測定:細胞傳代至培養(yǎng)瓶貼壁后,

4、分別用正常培養(yǎng)基和同體積含1/100、1/75的清開靈注射液的培養(yǎng)基處理細胞24h和48h,提取細胞總蛋白,免疫印跡法檢測細胞內(nèi)相關(guān)周期蛋白(CyclinB1、CDK1)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡通路的相關(guān)蛋白(Caspase-4、CHOP)表達情況。
  結(jié)果:
  1、 MTT法實驗結(jié)果顯示:清開靈注射液處理人食管癌Ec-109細胞后,與陰性對照組相比,結(jié)果具有顯著的統(tǒng)計學意義(P﹤0.05),其中能表明清開靈注射液對食管癌Ec-

5、109細胞量效關(guān)系的直線回歸方程為:Y=31.567X+0.1522,R2=0.999,P=0.000﹤0.05。
  2、免疫熒光染色法實驗結(jié)果顯示:清開靈注射液處理人食管癌Ec-109細胞后,在倒置熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),清開靈注射液用藥組細胞與陰性對照組相比,有較多的凋亡,表現(xiàn)為部分細胞核染色質(zhì)被染成橘紅色,同時可見部分細胞縮小或呈半月形等。
  3、流式細胞儀對細胞周期和凋亡率檢測表明:用清開靈注射液處理人食管癌Ec-

6、109細胞后,與陰性對照組相比,分布在 G2/M期的細胞數(shù)明顯增加,經(jīng)過統(tǒng)計學分析,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05);與陰性對照組相比,清開靈注射液組細胞的凋亡率明顯增加,其數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。
  4、 Western Blot實驗結(jié)果顯示:相關(guān)細胞周期蛋白CyclinB1和CDK1的表達量,與陰性對照組相比,清開靈注射液用藥組明顯減少,并且用藥劑量越大、作用時間越長,表達量越少;而與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的蛋白C

7、aspase-4、CHOP的表達呈增多趨勢,對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,差異具有有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。
  結(jié)論:
  1、清開靈注射液能明顯的抑制人食管癌Ec-109細胞的生長,主要表現(xiàn)在誘導凋亡和抑制增殖兩方面,且具有劑量和時間相關(guān)性。
  2、清開靈注射液抑制人食管癌 Ec-109細胞增殖的機制可能與相關(guān)周期調(diào)控因子CyclinB1和CDK1高表達導致細胞阻滯于G2/M期有關(guān)。
  3、在清開靈注射液

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