手參有效部位及其體內(nèi)代謝過程的質(zhì)譜分析方法研究.pdf

1、本論文系統(tǒng)開展了以丁二酸芐酯苷類化合物為主要成分，具有益智活性的手參有效部位CE及其體內(nèi)代謝過程的質(zhì)譜分析方法研究。首先在正、負(fù)離子模式下，對丁二酸芐酯苷類化合物的質(zhì)譜裂解行為進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)了罕見的大基團(tuán)轉(zhuǎn)移的重排反應(yīng)及其特異離子，并對其形成的機(jī)理進(jìn)行了探討。在此基礎(chǔ)上，將化合物的質(zhì)譜裂解行為與可能的代謝途徑特征相結(jié)合，原型成分和代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)推斷互相佐證，運(yùn)用特征離子提取與質(zhì)量虧損過濾兩種有效的數(shù)據(jù)挖掘手段，建立了從復(fù)雜生物樣

2、本中簡便、快速地發(fā)現(xiàn)及識別原型成分和代謝產(chǎn)物的LC-MS/MS新分析方法，實(shí)現(xiàn)了原型成分及代謝產(chǎn)物的快速分析鑒定。同時，通過對比分析有效部位CE及其不同給藥途徑的大鼠生物樣本，獲得了CE中丁二酸芐酯苷類成分的體內(nèi)整體代謝信息。
　　 本論文的研究內(nèi)容主要包括以下三個部分：
　　 1．丁二酸芐酯苷類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律研究
　　 采用正、負(fù)離子檢測模式的ESI-MSn方法、精確質(zhì)量測定、堿金屬加合離子和氘標(biāo)記方法，

3、系統(tǒng)地研究了丁二酸芐酯苷類化合物的質(zhì)譜裂解行為，發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)特征與質(zhì)譜行為的相關(guān)性。該類化合物的[M+W]+(W=Li，Na,K)離子的裂解行為相似，均發(fā)生由4-亞甲基-2,5-環(huán)己二烯-1-酮大基團(tuán)引發(fā)的重排反應(yīng)，產(chǎn)生特異的重排離子。進(jìn)一步對此結(jié)果及其反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了分析與考察，提出這種特異的重排反應(yīng)可能是經(jīng)離子-中性復(fù)合物中間體的形成引發(fā)大基團(tuán)轉(zhuǎn)移的過程，并通過這類化合物的氘取代實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步支持了這一結(jié)果。此外，氧-芐基鍵和C-2位糖苷鍵

4、的斷裂也是主要裂解反應(yīng)。另外，研究發(fā)現(xiàn)[M+NH4]+離子具有不同的裂解行為，并且不發(fā)生重排反應(yīng)。這表明堿金屬離子及其結(jié)合位點(diǎn)對于引發(fā)特異裂解及重排反應(yīng)起著非常重要的作用。另外，根據(jù)負(fù)離子檢測模式下MS/MS譜的差異可以實(shí)現(xiàn)酯化位置不同的2-氧-葡萄糖基丁二酸單芐酯苷同分異構(gòu)體的有效區(qū)分。通過對丁二酸芐酯苷類化合物的裂解規(guī)律研究，豐富了該類化合物的氣相離子化學(xué)反應(yīng)，建立了快速分析這類化合物的質(zhì)譜分析方法，并為復(fù)雜混合物中同類成分的篩查及

5、結(jié)構(gòu)鑒定、藥物代謝產(chǎn)物體內(nèi)外分析等提供了重要的分析依據(jù)。
　　 2．手參有效部位CE中丁二酸芐酯苷類成分的RRLC-MS/MS分析方法研究
　　 在掌握丁二酸芐酯苷類化合物的質(zhì)譜裂解特征基礎(chǔ)上，利用RRLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)，將正、負(fù)離子檢測模式相結(jié)合，對有效部位CE中所含成分開展了系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)分析，在兩個分析周期內(nèi)共分析推斷出35個以丁二酸芐酯苷類為主的成分，其中丁二酸單芐酯苷類27個，丁二酸雙芐酯苷類5個，丁二酸苷類

6、2個，天麻素類1個，其中包括了7組同分異構(gòu)體。本研究建立的丁二酸芐酯苷類成分的分析方法，對于快速、準(zhǔn)確地從復(fù)雜混合物中尋找及發(fā)現(xiàn)活性產(chǎn)物或先導(dǎo)物具有重要意義，為揭示有效部位的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了分析依據(jù)。
　　 3．手參有效部位CE大鼠體內(nèi)代謝過程的質(zhì)譜分析方法研究
　　 本研究采用RRLC-（±）ESI-MS/MS方法，開展了有效部位CE在大鼠體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化研究。探索并提出將特征離子提取與質(zhì)量虧損過濾手段相結(jié)合，從復(fù)雜體

7、系中高效挖掘數(shù)據(jù)的新方法，實(shí)現(xiàn)了快速、準(zhǔn)確、全面地尋找及發(fā)現(xiàn)原型成分和代謝產(chǎn)物。進(jìn)一步以化合物的質(zhì)譜裂解行為與可能的代謝途徑特征相結(jié)合獲取互補(bǔ)信息，對大鼠尾靜脈注射和灌胃兩種給藥方式不同采樣時間點(diǎn)生物樣本中原型成分和代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析鑒定,共發(fā)現(xiàn)并推斷出34個原型成分和45個代謝產(chǎn)物的可能結(jié)構(gòu)。其中代謝產(chǎn)物來源于甲基化、脫水、去甲基化和異構(gòu)化等多種代謝途徑，并通過對比分析有效部位CE及其不同給藥途徑的生物樣本，獲得了CE中成分生物轉(zhuǎn)化的