戊四氮誘導(dǎo)發(fā)育鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬內(nèi)神經(jīng)發(fā)生與突觸重塑的研究.pdf

1、目的：目前，對(duì)癲癇反復(fù)發(fā)作的病因的說法很多，但齒狀回顆粒細(xì)胞的神經(jīng)發(fā)生增加，顆粒細(xì)胞的苔蘚纖維異常發(fā)芽及伴隨的突觸重塑已被認(rèn)為是其細(xì)胞機(jī)制之一。故近年有關(guān)神經(jīng)發(fā)生和突觸重塑的研究正成為腦科學(xué)中令人矚目的熱點(diǎn)，但是這些現(xiàn)象對(duì)臨床上常見的兒童癲癇反復(fù)發(fā)作的病因是否有作用，目前還少有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在探討戊四氮誘導(dǎo)發(fā)育鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬突觸素的表達(dá)和齒狀回顆粒細(xì)胞神經(jīng)發(fā)生的影響以及MK-801對(duì)這些結(jié)果的抑制作用，為臨床尋求以神經(jīng)發(fā)生和突觸素

2、為靶點(diǎn)的治療手段提供科學(xué)依據(jù)。 方法：腹腔注射戊四氮制作發(fā)育期SD大鼠(7天、14天、21天和28天四個(gè)日齡組)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)發(fā)作模型，再將各同齡組隨機(jī)分為NS組、SE組和MK-801組，選擇處理后第7天、14天和28天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察。采用BrdU標(biāo)記新生細(xì)胞，再以β微管蛋白Ⅲ(TuJ1)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)雙標(biāo)免疫組織化學(xué)方法分別標(biāo)記神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，檢測(cè)致癇后發(fā)育鼠海馬齒狀回神經(jīng)元發(fā)生，同時(shí)采用p38

3、免疫組織化學(xué)方法監(jiān)測(cè)突觸素的表達(dá)以及用MK-801治療后對(duì)這些結(jié)果的影響。 結(jié)果： 1．BrdU免疫反應(yīng)產(chǎn)物：SE發(fā)作后第7天和14天，SE組中各日齡組幼鼠齒狀回BrdtJ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于各自的NS組(P＜0.01)，而MK-801組較SE組明顯減少(P＜0.05)，但在第28天三組之間無明顯差異(p＞0.05)；發(fā)作后第7天，三組中大部分BrdU陽(yáng)性細(xì)胞分布于顆粒下層；而在發(fā)作后第14天，新生細(xì)胞在SE和MK-801

4、組中除主要分布于顆粒細(xì)胞層以外，另有一部分位于門區(qū)和內(nèi)分子層，NS組幼鼠的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于整個(gè)顆粒細(xì)胞層。新生細(xì)胞在由顆粒下層向顆粒細(xì)胞層遷移的過程中，胞核變大，形狀更接近圓形或卵圓形。陰性對(duì)照試驗(yàn)切片無特征性免疫反應(yīng)產(chǎn)物。 2.免疫組織化學(xué)雙標(biāo)記：通過BrdU／TuJl與BrdU／GFAP雙標(biāo)記染色，可鑒別出BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)胞類型，BrdU和TuJl雙陽(yáng)性的細(xì)胞為新生神經(jīng)元，BrdU和GFAP雙陽(yáng)性的細(xì)胞為新生神

5、經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。BrdtU陽(yáng)性的細(xì)胞胞核呈深藍(lán)色，TuJl／GFAP陽(yáng)性的細(xì)胞胞漿呈紅色。所有日齡大鼠在SE發(fā)作后第7天，SE組與NS組齒狀回的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞同時(shí)表達(dá)TuJl分別大約為82.5％和80.3％(P>0.05)，發(fā)作后第14天SE組與NS組分別大約為73.6％和70.1％(P>0.05)，兩組約4％～5％左右為GFAP陽(yáng)性，無明顯差異。另外，有部分BrdU陽(yáng)性細(xì)胞并不同時(shí)表達(dá)神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的抗原，無法確定其細(xì)胞類型。以上

6、免疫組織化學(xué)對(duì)照實(shí)驗(yàn)均為陰性。 3.p38免疫反應(yīng)產(chǎn)物：NS組切片的海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)p38免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈板層樣分布，神經(jīng)氈內(nèi)免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈特異性點(diǎn)狀或顆粒狀沉積，多為細(xì)顆粒狀沉積，神經(jīng)元胞質(zhì)、膠質(zhì)細(xì)胞、血管及白質(zhì)不被染色。對(duì)NS組中各日齡鼠p38的COD值進(jìn)行分析比較，結(jié)果提示在P14、P21、P28的p38的表達(dá)逐漸增加，且兩兩比較有顯著性差異(P<0.05)，但P35、P42、P49、P56與P28相比較均無顯著性差異(P>0.0

7、5)。SE組海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)p38免疫反應(yīng)產(chǎn)物的分布特征與NS組無明顯變化，但定量結(jié)果顯示，各個(gè)日齡組在SE發(fā)作后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬CA3區(qū)苔蘚纖維層和齒狀回分子層內(nèi)帶p38免疫反應(yīng)產(chǎn)物COD值顯著增加(P<0.05)，其中均以發(fā)作后第14天增加達(dá)最高峰。而MK-801組齒狀回分子層內(nèi)帶及CA3區(qū)苔蘚纖維層p38免疫反應(yīng)產(chǎn)物COD值較SE組中對(duì)應(yīng)日齡組和時(shí)間點(diǎn)均有顯著降低(P<0.01)。 結(jié)論：1.癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作可使不同日齡的發(fā)育鼠腦