ClC-3氯通道對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、氯離子通道是普遍存在于胞漿膜及胞內(nèi)細(xì)胞器膜上的跨膜蛋白，通過(guò)有選擇性地使氯離子進(jìn)出細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種功能，如細(xì)胞膜電位的穩(wěn)定、胞內(nèi)pH的維持、跨上皮細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、激素分泌、興奮性的調(diào)節(jié)等。ClC-3氯通道隸屬于ClC氯通道家族，其通道特性和功能目前尚未完全清楚。Duan等的研究結(jié)果提示ClC-3可能編碼了容積調(diào)節(jié)性氯通道，但隨后的一些研究對(duì)該假設(shè)持否定觀點(diǎn)，我們實(shí)驗(yàn)室最近的研究結(jié)果表明，在A10血管平滑肌細(xì)胞上ClC-3氯通道參與了細(xì)胞

2、容積調(diào)節(jié)，是容積調(diào)節(jié)性氯通道的分子基礎(chǔ)。 細(xì)胞容積的穩(wěn)定是維持細(xì)胞正常生理功能的重要環(huán)節(jié)，而在不同的生理或病理情況下，細(xì)胞的容積常發(fā)生改變，表現(xiàn)為皺縮或腫脹，此時(shí)細(xì)胞通過(guò)啟動(dòng)調(diào)節(jié)性容積增加(regulatoryvolumeincrease，RVI)或調(diào)節(jié)性容積減低(regulatoryvolumedecrease，RVD)機(jī)制可使細(xì)胞容積恢復(fù)正常。近年研究發(fā)現(xiàn)除了參與調(diào)節(jié)細(xì)胞容積外，容積調(diào)節(jié)性氯通道在免疫反應(yīng)，細(xì)胞膜電位穩(wěn)定，胞

3、內(nèi)酸堿平衡以及細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程中亦發(fā)揮了重要作用。 細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及凋亡過(guò)程都伴隨有細(xì)胞容積的改變。細(xì)胞分裂增殖的早期，大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)因?yàn)榇x增強(qiáng)而增加氨基酸、有機(jī)、無(wú)機(jī)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取，同時(shí)伴隨水的進(jìn)入，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，容積增大。細(xì)胞容積的改變，激活細(xì)胞膜K+通道和Cl-通道，通過(guò)RVD過(guò)程使細(xì)胞體積恢復(fù)到正常。而細(xì)胞凋亡過(guò)程中胞體皺縮是其典型的形態(tài)學(xué)變化特征，這種細(xì)胞皺縮在等滲條件下即可發(fā)生，主要與K+、Cl-外流

4、，及其伴隨的H2O的外流有關(guān)，被稱(chēng)為凋亡性容積減低(apoptosisvolumedecrease，AVD)過(guò)程。研究表明，進(jìn)行性的AVD過(guò)程最終可以誘發(fā)細(xì)胞凋亡，阻斷AVD過(guò)程則可以抑制凋亡的發(fā)生，提示AVD可能是細(xì)胞凋亡發(fā)生的上游事件。 細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡是細(xì)胞生理過(guò)程的兩個(gè)方面，增殖和凋亡的平衡維持了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。我們實(shí)驗(yàn)室以往的研究表明反義ClC-3寡核苷酸可抑制ET-1誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖，提示ClC-3

5、氯通道參與了血管平滑肌細(xì)胞增殖過(guò)程。但對(duì)于ClC-3氯通道與血管平滑肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。 基于我們實(shí)驗(yàn)室原有的工作基礎(chǔ)，ClC-3氯通道有可能參與血管平滑肌的凋亡，為此本研究圍繞該問(wèn)題，進(jìn)行如下工作：建立H2O2誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡模型；觀察轉(zhuǎn)染反義ClC-3寡核苷酸與gpClC-3-cDNA對(duì)H2O2誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的影響；H2O2誘導(dǎo)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡過(guò)程中靜息[Ca2+]i的變化及Cl