CD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭及原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、第一部分:CD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中的表達(dá)及臨床意義
　　乙型肝炎病毒感染是一個(gè)重要的世界衛(wèi)生問(wèn)題。它被認(rèn)為是各種肝臟急慢性疾病的主要病因之一。由于某些病因的急劇發(fā)展，一些慢性乙型肝炎(CHB)患者有可能發(fā)展為肝衰竭。我們將這些由慢性乙型病毒性肝炎發(fā)展而來(lái)的肝衰竭稱為慢加急性乙型肝炎肝衰竭(ACHBLF)，其在所有肝衰竭病因中所占比例高達(dá)70％。
　　ACHBLF的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，其死亡率高，預(yù)后差，因而

2、降低肝衰竭患者的發(fā)病率和死亡率成為研究熱點(diǎn)。尋找能預(yù)測(cè)肝衰竭的生物標(biāo)志物能加強(qiáng)對(duì)患者的監(jiān)測(cè)和治療，降低ACHBLF患者的發(fā)病率和死亡率。目前大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，ACHBLF的發(fā)病可能與自身強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)有關(guān)，因此，充分理解ACHBLF發(fā)病過(guò)程的免疫應(yīng)答十分重要。而CD163及sCD163是近期發(fā)現(xiàn)的與急性炎癥反應(yīng)過(guò)程密切相關(guān)的免疫因子。CD163的研究尚在起步階段，CD163在ACHBLF患者的免疫過(guò)程中可能起到重要作用，但其在ACHBL

3、F患者中扮演的角色尚不完全明確，對(duì)診斷及預(yù)后評(píng)估意義仍未確定，而這正是我們研究的重點(diǎn)及方向。
　　目的:
　　檢測(cè)ACHBLF患者中外周血單個(gè)核細(xì)胞表面CD163及外周血血漿中sCD163的表達(dá)，明確其在急性炎性反應(yīng)過(guò)程中扮演的角色及臨床意義;為臨床治療ACHBLF患者尋找新的臨床監(jiān)測(cè)因子。
　　方法:
　　ELISA方法檢測(cè)ACHBLF患者、CHB患者及正常對(duì)照組(HCs)血漿中sCD163的表達(dá)水平;流式細(xì)胞

4、術(shù)檢測(cè)ACHBLF患者、CHB患者及HCs外周血單個(gè)核細(xì)胞CD163的陽(yáng)性率和CD163平均熒光強(qiáng)度(MFI)，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)量ACHBLF患者、CHB患者及HCs外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD163mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、外周血中CD163陽(yáng)性的單個(gè)核細(xì)胞比率在ACHBLF患者中要明顯高于CHB患者及HCs，具有顯著性差異。外周血中CD163MFI在ACHBLF患者中較其他兩組升高，但三組無(wú)

5、顯著性差異。
　　2、CD163mRNA在ACHBLF患者中的表達(dá)要明顯高于CHB及HCs，具有顯著性差異。
　　3、血漿中sCD163表達(dá)在ACHBLF患者中明顯升高，且與患者預(yù)后有明顯相關(guān)，在生存組患者中的血漿sCD163濃度要明顯低于死亡組患者sCD163濃度，具有顯著性差異。
　　4、血漿中sCD163表達(dá)在ACHBLF患者中與反映患者預(yù)后的MELDScore呈正相關(guān)，與HBV-DNA正相關(guān)，凝血酶原活動(dòng)度負(fù)相

6、關(guān)，與總膽紅素水平無(wú)相關(guān)。
　　5、外周血中CD163陽(yáng)性的單個(gè)核細(xì)胞比率在CHB患者中要明顯高于HCs，具有顯著性差異。
　　6、CD163mRNA在CHB患者中的表達(dá)要高于HCs，但并不具有顯著性差異。
　　7、血漿sCD163表達(dá)在CHB患者中明顯升高，高于HCs，但是升高幅度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其在其ACHBLF患者中升高幅度，具有顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　作為在巨噬細(xì)胞表面特異表達(dá)的CD163在ACHBL

7、F患者、CHB患者發(fā)病過(guò)程中起重要作用，本研究提示CD163與sCD163都可以作為ACHBLF患者有用的標(biāo)志物，其中sCD163檢測(cè)更為簡(jiǎn)單直接，組間差異更為明顯，與疾病的嚴(yán)重程度明顯相關(guān)。CD163與sCD163都可以作為肝衰竭患者預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)，與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。
　　第二部分:CD163在原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá)及臨床意義
　　感染乙型肝炎病毒的患者易罹患肝癌，有學(xué)者統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎及慢性乙肝后肝硬化患者罹患肝

8、癌的幾率是正常人的9-10倍。80％以上的原發(fā)性肝癌患者有乙型肝炎病毒感染，原發(fā)性肝癌(HCC)是肝臟的惡性腫瘤，在所有的惡性腫瘤中死亡率高達(dá)第5位，其五年生存率不足5％，這些數(shù)據(jù)表明，了解HCC的發(fā)病過(guò)程，進(jìn)行早期診斷與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估對(duì)HCC患者非常重要，但是目前尚缺乏非常有效的早期預(yù)測(cè)手段及監(jiān)測(cè)方法。
　　與腫瘤相關(guān)的增高的巨噬細(xì)胞被認(rèn)為在腫瘤的病因及不良預(yù)后中扮演了重要角色，其中最近引起人們廣泛興趣的是，巨噬細(xì)胞的M2分型副群具有

9、抗炎的作用，而抗炎因子CD163是M2副群的特異性標(biāo)記，且為巨噬細(xì)胞活化的標(biāo)記物，它的高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的血管生成，纖維組織細(xì)胞重組，影響組織重建過(guò)程，在某些腫瘤的病理過(guò)程及在急慢性肝臟炎癥疾病中起著重要作用。其在大量炎癥性疾病及腫瘤性疾病中的廣泛發(fā)現(xiàn)，使其有望成為近年來(lái)非常有效且易于監(jiān)測(cè)的臨床指標(biāo)。
　　而且在前一部分試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)ACHBLF患者中外周血及血漿中CD163與sCD163表達(dá)水平的檢測(cè)，我們明確了在急性炎癥反應(yīng)過(guò)程

10、中CD163及sCD163的表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系。在本實(shí)驗(yàn)中，我們選取了HCC患者作為研究對(duì)象，明確CD163及sCD163在HCC患者中的表達(dá)，明確其在HCC發(fā)病過(guò)程中的重要作用，了解其與臨床指標(biāo)及預(yù)后的聯(lián)系，尋找新的發(fā)病機(jī)理及治療方向。
　　目的:
　　探討HCC患者中外周血單個(gè)核細(xì)胞CD163及血漿中sCD163的表達(dá)，可明確其在HCC疾病過(guò)程中扮演的角色及臨床意義，為臨床治療HCC尋找監(jiān)測(cè)因子，探尋新的發(fā)病機(jī)理及治療

11、方向。
　　方法:
　　ELISA方法檢測(cè)HCC患者、LC患者、CHB患者及HCs血漿中sCD163的表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HCC患者、LC患者、CHB患者及HCs外周血單個(gè)核細(xì)胞CD163的陽(yáng)性率和CD163平均熒光強(qiáng)度;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)量HCC患者、LC患者、CHB患者及HCs組外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD163mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、外周血CD163陽(yáng)性的單個(gè)核細(xì)胞比率在H

12、CC患者中明顯升高，組間有著顯著性差異;CD163免疫熒光強(qiáng)度組間有顯著性差異。
　　2、HCC患者中，CD163mRNA表達(dá)明顯升高，組間具有顯著性差異。
　　3、血漿中sCD163濃度在HCC患者中明顯升高，組間具有顯著性差異。
　　4、外周血中表達(dá)CD163的單個(gè)核細(xì)胞比率在LC患者中要明顯高于HCs，具有顯著性差異。
　　5、CD163mRNA在LC患者中的表達(dá)要高于HCs，組間具有顯著性差異。
　

13、　6、血漿sCD163表達(dá)在LC、CHB患者中明顯升高，高于HCs，LC患者血漿sCD163升高幅度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其在其CHB患者中升高幅度，具有顯著性差異。
　　7、血漿sCD163表達(dá)水平與HCC患者的AFP、HBV-DNA、HBeAg無(wú)明顯相關(guān)。
　　8、根據(jù)意大利CLIP評(píng)分分析，sCD163濃度與評(píng)分之間不存在明顯相關(guān)性，TNM分期，Ⅲ期存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及ChildC級(jí)的HCC患者的sCD163濃度要高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移Ⅰ、Ⅱ期患

14、者，但是無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　作為在巨噬細(xì)胞表面特異表達(dá)的CD163在HCC、LC患者發(fā)病過(guò)程中起重要作用，本研究提示CD163與sCD163都可以作為HCC及LC患者有用的標(biāo)志物，其中sCD163檢測(cè)更為簡(jiǎn)單直接，組間差異更為明顯，與疾病的嚴(yán)重程度明顯相關(guān)。但是sCD163與臨床指標(biāo)在HCC患者中均無(wú)明確相關(guān)，與患者預(yù)后的聯(lián)系仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。
　　第三部分:CD163綜述
　　CD163結(jié)構(gòu)及表達(dá)

15、形式
　　單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在人類免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。巨噬細(xì)胞可分為M1型亞群和M2型亞群，兩種細(xì)胞分別有促炎和抗炎的作用。CD163是在已知的M2型巨噬細(xì)胞表面特異性表達(dá)的，屬于清道夫受體半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域家族B。它是一個(gè)有著130kD重量的Ⅰ型蛋白，共有5種同源異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)中含有9個(gè)清道夫受體半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域。CD13在體內(nèi)共有兩種存在形式:一種是以跨膜大分子的形式存在于單核巨噬細(xì)胞上;另一種是存在于血漿或其它組織液內(nèi)

16、，具有可溶性，即sCD163。
　　CD163的作用
　　CD163可以特異地識(shí)別血紅蛋白:結(jié)合珠蛋白復(fù)合體，是體內(nèi)血紅蛋白的特異性清道夫受體。通過(guò)清除游離的血紅蛋白，CD163可起到調(diào)節(jié)人體免疫的作用。CD163還可識(shí)別腫瘤壞死因子樣凋亡弱誘導(dǎo)因子(TWEAK)，并與其特異性結(jié)合，發(fā)揮抗炎作用，擔(dān)當(dāng)著革蘭氏陽(yáng)性菌及革蘭氏陰性菌監(jiān)控器的角色;在炎癥反應(yīng)刺激下，CD163可以和自己的配體結(jié)合，轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)，促進(jìn)單核細(xì)胞與上皮細(xì)胞的

17、黏附，誘導(dǎo)炎性介質(zhì)IL-10等炎癥因子的釋放。
　　CD163與各種疾病的關(guān)系
　　CD163及sCD163與免疫系統(tǒng)關(guān)系密切。大量的臨床及實(shí)驗(yàn)室研究證實(shí)，CD163及sCD163與各種炎癥性、腫瘤性、心腦血管疾病密切相關(guān)。在嚴(yán)重?zé)齻?、急性肝衰竭等?yán)重炎性疾病時(shí)，CD163明顯升高，與預(yù)后有明顯相關(guān);在肝癌、淋巴瘤等惡性腫瘤中，亦可見(jiàn)CD163的明顯升高，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及治療反應(yīng)不佳的病人中尤為明顯，提示CD163在腫瘤患者預(yù)