視網(wǎng)膜變性大鼠視網(wǎng)膜CSPGs表達(dá)及CSPGs降解對光感受器凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　1.建立碘酸鈉誘導(dǎo)視網(wǎng)膜變性大鼠模型，探討硫酸軟骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans，CSPGs)在碘酸鈉誘導(dǎo)視網(wǎng)膜變性大鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)特點(diǎn)。
　　2.證實硫酸軟骨素酶（chondroitinaseABC,ChABC）對視網(wǎng)膜變性大鼠中硫酸軟骨素蛋白多糖的降解作用，及緩解視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡，并初步探討其緩解凋亡的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.經(jīng)腹腔

2、注射新鮮配制的3％ NaIO3（100mg·kg-1）建立視網(wǎng)膜變性動物模型。實驗大鼠隨機(jī)分成：正常對照組、造模14d組、造模28d組。取眼球做病理檢查，蘇木素-伊紅（HE）染色及細(xì)胞凋亡檢測，驗證視網(wǎng)膜變性大鼠的建立；免疫熒光法觀察視網(wǎng)膜上CSPGs表達(dá)的時空規(guī)律；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測CSPGs多功能蛋白聚糖（Versican)mRNA的表達(dá)情況。
　　2.造模后7d，6只視網(wǎng)膜變性大鼠玻璃體腔注射2μl

3、ChABC酶作為治療組，另6只視網(wǎng)膜變性大鼠玻璃體腔注射等量磷酸鹽緩沖液(Phosphat buffer liquid,PBS)作為PBS組，6只視網(wǎng)膜變性大鼠和6只正常SD大鼠不行玻璃體腔注射作為對照組。玻璃體腔注射后3w，采用免疫熒光法觀察各組大鼠視網(wǎng)膜CSPGs表達(dá)；RT-PCR法檢測CSPGs多功能蛋白聚糖（Versican)mRNA表達(dá)，并檢測光感受器凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.注射NaIO3后，大鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)

4、變性改變，且光感受器發(fā)生漸進(jìn)性凋亡，造模14d、28d凋亡率分別為(32.33±2.34)%、(41.67±2.58)%，各組間差異顯著（F=409.81，P＜0.01）。造模14d組，CS-56在視錐視桿層、外核層、內(nèi)核層、節(jié)細(xì)胞層表達(dá)；造模28d組，CSPGs繼續(xù)擴(kuò)增到外叢狀層。隨造模時間延長，各層熒光表達(dá)逐漸增強(qiáng)。造模組Versican mRNA表達(dá)(1.02±0.06）顯著高于正常對照組(0.23±0.02)（F=487.23，

5、P＜0.01）。
　　2.(1）偶見SD對照組大鼠CSPGs于脈絡(luò)膜、內(nèi)核層、節(jié)細(xì)胞層弱陽性表達(dá)，注射碘酸鈉4w后大鼠CSPGs擴(kuò)增到外核層、外叢狀層，各層熒光明顯增強(qiáng)，而同期ChABC酶治療組大鼠CSPGs在視網(wǎng)膜各層表達(dá)明顯減弱；Versican mRNA表達(dá)與此一致，正常SD對照組、視網(wǎng)膜變性對照組、PBS組、治療組Versican mRNA的灰度比分別是(0.18±0.02)、(0.92±0.03)、(0.98±0.06)

6、和(0.30±0.01)，其中，視網(wǎng)膜變性對照組和 PBS組灰度比無顯著差異（P＞0.05），治療組灰度比明顯低于視網(wǎng)膜變性對照組（F=562.01，P＜0.01）。（2）正常SD對照組、視網(wǎng)膜變性對照組、PBS組、治療組大鼠視網(wǎng)膜光感受器凋亡率分別為(7.33±1.03)%、(40.0±2.37)%、(41.83±2.32)、（35.2+1.94）%，視網(wǎng)膜變性對照組和 PBS組凋亡率無顯著差異（P＞0.05），治療組凋亡率顯著低于視