法尼醇X受體上調(diào)PC表達(dá)及其機制初探.pdf

1、研究背景:
　　 PC是肝臟分泌的糖蛋白,在內(nèi)皮細(xì)胞表面水解活化為活化蛋白C(activated proteinC,APC)后,發(fā)揮抗凝、抗炎的作用。重組人活化蛋白C(recombinated human protein C,rhAPC)在臨床治療中顯著改善了膿毒血癥患者的預(yù)后。法尼醇X受體(Famesoid XReceptor,FXR)作為一種核受體,調(diào)節(jié)維持肝臟的各種代謝,發(fā)揮保肝的作用。FXR基因敲除小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的肝炎,

2、天然的腫瘤易患性。最近的研究不斷提示FXR具有顯著的抗炎功能,是潛在的抗炎靶標(biāo)分子。生理濃度下的多種初級和次級膽汁酸,以及一些多不飽和脂肪酸可激活FXR,其中以鵝脫氧膽汁酸(chenodexycholic acid,CDCA)為FXR的最適天然配體。由于FXR和PC均表達(dá)于肝臟,且二者均與炎癥密切相關(guān),那么PC是否是FXR的一個新靶基因,其表達(dá)是否可受到FXR的調(diào)節(jié)?弄清該問題,將為進(jìn)一步闡明二者在炎癥發(fā)生發(fā)展中的作用,尋找防治炎癥的新

3、靶點提供科學(xué)依據(jù)。
　　 研究目的:探討FXR對PC表達(dá)的影響及可能機制。
　　 研究方法:
　　 選取肝癌細(xì)胞HepG2為細(xì)胞模型,經(jīng)FXR激動劑CDCA處理24h后,RT-PCR、Real-time PCR檢測PC mRNA的變化;ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PC蛋白表達(dá)的差異。
　　 在線預(yù)測PC基因5'側(cè)翼啟動子區(qū)域(-3000bp～+1.50bp)可能存在的FXR結(jié)合位點,據(jù)此構(gòu)建(包括或不包

4、括可能位點)含有PC基因上游啟動子不同長度片段的報告基因重組質(zhì)粒。在胚肝L02細(xì)胞中,通過瞬時共轉(zhuǎn)染的方法,運用熒光素酶報告基因檢測FXR活化對PC啟動子活性的影響。
　　 用RT-PCR、Real-time PCR及EIASA方法檢測PPARγ活化對PC表達(dá)的影響。進(jìn)而確認(rèn)是否存在"FXR→PPARγ→PC"這樣一條調(diào)控通路。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)在HepG2細(xì)胞中,CDCA活化FXR,上調(diào)PC mR

5、NA和蛋白表達(dá);
　　 (2)在L02細(xì)胞中,FXR的活化可增強PC啟動子的活性,但沒有發(fā)現(xiàn)與FXR結(jié)合的位點。
　　 (3)在HepG2細(xì)胞中,PPARγ的活化可上調(diào)PC的表達(dá)。
　　 (4)GW9662拮抗PPARγ,可部分抑制FXR活化的PC表達(dá)增高,說明存在“活化FXR→PPARγ→PC"這樣的間接調(diào)控通路。而關(guān)于。PPARγ誘導(dǎo)PC表達(dá)及FXR增強PC啟動子活性的分子機制,還有待進(jìn)一步的研究。