PDC-E2的純化、活性鑒定及中國北方人群原發(fā)性膽汁性肝硬化HLA易感基因的初步研究.pdf

1、原發(fā)性膽汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis，PBC)是一種自身免疫性的慢性進(jìn)行性肝臟疾患，其特征是自發(fā)性的肝內(nèi)小膽管破壞，導(dǎo)致進(jìn)展性的肝內(nèi)膽汁淤積，肝纖維化，并最終引起肝硬變和肝功能衰竭。近年來隨著國內(nèi)對該病認(rèn)識的不斷提高，以及實(shí)驗(yàn)室檢查方法的不斷改進(jìn)，PBC的發(fā)病率和或確診率呈逐漸上升趨勢，但目前針對該病缺乏特異有效的治療手段，肝移植是晚期病人的唯一選擇。因此有必要加強(qiáng)對PBC病因及發(fā)病機(jī)理的基礎(chǔ)研究，以為進(jìn)一

2、步尋找新的治療途徑打下基礎(chǔ)。 PBC的病程進(jìn)展多樣，其早期診斷對識別快速進(jìn)展性病人，盡快給予適當(dāng)?shù)闹委熀瓦x擇肝移植的時(shí)機(jī)十分重要?？咕€粒體抗體(AMA，M2抗體)被認(rèn)為是目前發(fā)現(xiàn)的唯一的PBC特異性血清學(xué)標(biāo)志。PBC特異的AMA主要針對位于線粒體內(nèi)膜的三個酮酸脫氫酶復(fù)合物家族(OADC)中的各個亞單位，即線粒體M2抗原的主要成分，其中最主要針對丙酮酸脫氫酶復(fù)合物E2亞單位(PDC-E2)。PDC-E2被認(rèn)為是最可能的誘導(dǎo)膽管上皮

3、產(chǎn)生自身免疫損傷的靶抗原。抗PDC-E2的自身抗體可以在95％的PBC患者中檢測出。因此，制備具有良好免疫活性的PDC-E2純化蛋白將為進(jìn)一步研究PBC的發(fā)病機(jī)制以及PBC的診斷打下良好的物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究利用免疫親和層析技術(shù)對PDC-E2的原核表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化，并通過ELISA和免疫印跡試驗(yàn)對純化蛋白進(jìn)行了免疫活性鑒定。結(jié)果表明純化的PDC-E2重組蛋白與PBC病人血清中的自身抗體結(jié)合的特異性極高，其中與AMA陽性的PBC患者血清的陽

4、性反應(yīng)率達(dá)100％，而其它肝病患者和健康人的陽性率基本為零。 現(xiàn)已比較明確認(rèn)為遺傳因素在PBC的發(fā)病中起了重要作用，認(rèn)為PBC主要與某些MHCⅡ類基因，特別是HLA-DRB1*08基因關(guān)系密切。但在不同種族和人群間的研究結(jié)果并不一致，并且缺乏中國北方漢族人群的相關(guān)資料。本課題利用基因芯片正向雜交分型技術(shù)和SSP-PCR技術(shù)，檢測了67例中國北方漢族人群PBC患者的HLA-DR和HLA-DQ型別，并以231例健康人群資料作為對照，