胰島素反饋調(diào)節(jié)小鼠胰腺β細胞系MIN6的mVGLUT2基因表達及其機制的初探.pdf

1、目的:
　　胰島素代償性分泌不足是2型糖尿病發(fā)生的重要原因，以谷氨酸作為信使分子的胰島素分泌系統(tǒng)是整個胰島素分泌機制中的重要組成部分，這一系統(tǒng)稱為谷氨酰胺能系統(tǒng)，而囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運子(VGLUT)將谷氨酸轉(zhuǎn)運至胰島素分泌囊泡的過程是胰島素分泌過程中的限速步驟。本文主要從胰島素反饋調(diào)節(jié)小鼠胰腺β細胞系MIN6細胞VGLUT2(mVGLUT2)基因表達調(diào)控入手，了解這一反饋調(diào)節(jié)機制在胰島素反饋調(diào)節(jié)小鼠胰腺β細胞功能中的作用，進一步探討這

2、個反饋調(diào)節(jié)作用在胰島素分泌過程中的影響及其在2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中的意義。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)小鼠胰腺β細胞系MIN6細胞，然后以不同濃度的胰島素作用于MIN6細胞，分別以Real-time PCR和Western blot的方法檢測胰島素對mVGLUT2的轉(zhuǎn)錄和翻譯的調(diào)控情況，利用IR-siRNA、IRS1/2-siRNA干擾胰島素信號通路中參與因子（IR、IRS1、IRS2），觀察這些參與因子與mVGLUT2基因

3、表達的關(guān)系，分別以Real-time PCR和Western blot方法檢測采用RNA干擾(IR、IRS1、IRS2)后mVGLUT2基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯的調(diào)控情況;最后用mVGLUT2-siRNA干擾MIN6細胞，并利用流式細胞技術(shù)檢測mVGLUT2被基因干擾后小鼠胰腺β細胞系MIN6細胞線粒體膜電位的變化。
　　結(jié)果:
　　胰島素在一定的濃度作用下抑制了mVGLUT2基因在RNA及蛋白質(zhì)水平的表達，且這一反饋抑制只在特定的

4、時間點發(fā)生。采用RNA干擾技術(shù)干擾胰島素信號通路中的參與因子(IR、IRS1、IRS2)后，mVGLUT2基因在RNA及蛋白質(zhì)水平的表達出現(xiàn)上調(diào)。MIN6細胞經(jīng)mVGLUT2-siRNA干擾后其線粒體膜電位也出現(xiàn)降低。
　　結(jié)論:
　　無糖條件下胰島素在特定時間點抑制了VGLUT2基因的表達。利用RNA干擾技術(shù)干擾胰島素信號通路中的參與因子(IR、IRS1、IRS2)，mVGLUT2基因表達上調(diào)，提示胰島素通過其分泌通路對小