Schmid型干骺端軟骨發(fā)育異常一家系基因突變分析.pdf

1、目的:
　　 Schmid型干骺端軟骨發(fā)育異常(Schmid type metaphysealchondrodysplasia，SMCD)是常染色體遺傳的骨骺發(fā)育異常，患者臨床表現(xiàn)為搖擺步態(tài)，髖內(nèi)翻、膝內(nèi)翻及膝外翻，短肢畸形等。本研究通過對一個三代常染色體顯性遺傳Schmid型干骺端軟骨發(fā)育異常家系進(jìn)行基因測序，以明確患者及該家系的致病基因，這對豐富SMCD致病基因庫及中國人患病的基因突變情況具有重要意義，也將為遺傳咨詢、產(chǎn)前診

2、斷及新生兒篩查提供新的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.收集一個患病家系中10例成員靜脈血及臨床資料，其中先證者13歲，家系中成員根據(jù)遺傳表型診斷該疾病患者7例，另外抽取的50例正常對照組的靜脈血及臨床資料，用天根血液基因提取試劑盒提取基因組DNA。
　　 2.根據(jù)家系患病情況繪制家系圖譜。
　　 3.根據(jù)已報道的該病致病基因（COL10A1基因），用primer3設(shè)計引物。引物由上海博尚生物技術(shù)有限公司合

3、成。PCR擴增目的基因，Tgradient PCR儀進(jìn)行PCR反應(yīng)。1％瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。Fluorchem9900圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照分析。將PCR產(chǎn)物交由博尚公司純化、切膠回收及測序。Chromas圖譜分析，將結(jié)果與Pubmed基因序列比對。
　　 4.單克隆測序:PCR產(chǎn)物片段pMD18-T載體的構(gòu)建，目的片段連入PMD18-T載體，將各組分混勻離心后于4℃過夜連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞。挑選單克隆菌

4、落，加LB+AMP搖菌。提取質(zhì)粒，PCR電泳驗證陽性克隆。陽性克隆測序。
　　 結(jié)果:
　　 1.Chromas圖譜分析:該家系7位患者均在COL10A1基因三號外顯子第2100位點處缺失1個堿基C，圖譜顯示為缺失位點后雙峰圖像，其余位點未見基因突變。其余3位家系成員在該位點未有基因突變。
　　 2.50例正常對照組在該基因位點未有基因突變。
　　 3.家系中7位患者單克隆測序結(jié)果:7位患者均在COL10

5、A1基因三號外顯子第2100位點處缺失1個堿基C。
　　 4.與數(shù)據(jù)庫中提供基因比對，正常對照組與家系成員均在COL10A1基因三號外顯子第2144后多出3個堿基C。
　　 結(jié)論:
　　 1.該家系為Schmid型干骺端軟骨發(fā)育異常常染色體顯性遺傳，爺爺為正常人，致病基因由奶奶傳代，第二三代患者均為雜合突變。
　　 2.該家系7位患者在COL10A1基因第2100位點處缺失一個堿基C，導(dǎo)致框移突變，進(jìn)而引