骨髓巨噬細(xì)胞歸巢靜脈血栓及作用機(jī)理研究.pdf

1、[目的]探討骨髓細(xì)胞動(dòng)員和靜脈血栓的關(guān)系，并觀察單核細(xì)胞趨化蛋白-3(MCP-3)對(duì)骨髓細(xì)胞動(dòng)員的大鼠靜脈血栓中巨噬細(xì)胞趨化功能的影響，從而了解人重組粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)動(dòng)員骨髓細(xì)胞對(duì)大鼠靜脈血栓機(jī)化和再通的可能機(jī)理。 [方法]成年Sprague-Dawley雄性大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、血栓組和rhG-CSF組。正常組未行任何處理。假手術(shù)組大鼠的下腔靜脈未行縮窄及阻斷，余處理同血栓組。rhG-CSF組為模型

2、鼠術(shù)后當(dāng)天開(kāi)始連續(xù)7天在腹部皮下按25ug/kg注射rhG-CSF，其余組注射等體積生理鹽水。術(shù)前0.5h，術(shù)后1、3、5、7、10和14天采集外周血，以全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀檢測(cè)白細(xì)胞總數(shù)，血涂片顯微鏡下計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞(MNC)比例；用ELISA檢測(cè)外周血中MCP-3水平；術(shù)后7天、14天取血栓組和rhG-CSF組下腔靜脈標(biāo)本。切取左腎靜脈以下下腔靜脈至左右髂總靜脈匯合處，用免疫組化和圖像分析儀及電子顯微鏡觀察血栓機(jī)化率和血栓中巨噬細(xì)

3、胞密度；用RT-PCR檢測(cè)血栓中MCP-3 mRNA的表達(dá)情況。 [結(jié)果] 1.外周血MNC計(jì)數(shù)術(shù)后第3、5和7天，與血栓組外周血MNC計(jì)數(shù)(1.72±0.22×109/L，1.56±0.36×109/L，1.46±0.41×109/L)比較，rhG-CSF組外周血MNC計(jì)數(shù)(2.92±0.36×109/L，3.28±0.26x109/L，4.48±0.33×109/L)升高有顯著性差異。 2.血栓機(jī)化率和電鏡結(jié)果術(shù)后7

4、天和14天，與血栓組血栓機(jī)化率(14.64±2.32％，63.2 1±8.68％)比較，rhG-CSF組血栓的機(jī)化率(32.52±3.50％，89.54±5.62％)有顯著性差異(p＜0.01)。電鏡觀察顯示：與血栓組比較，rhG-CSF組巨噬細(xì)胞數(shù)量多，其周?chē)Ｒ?jiàn)新生幼稚血管和成熟再通血管，巨噬細(xì)胞吞噬功能活躍。 3.巨噬細(xì)胞密度術(shù)后第7天，與血栓組血栓內(nèi)巨噬細(xì)胞密度(1.57±0.82％)比較，rhG-CSF組明顯升高(8.

5、58±1.24％，p=0.0037)；術(shù)后第14天，血栓組血栓內(nèi)巨噬細(xì)胞密度為(5.62±1.07％)，rhG-CSF組為(14.52±1.32％，p=0.0079)，巨噬細(xì)胞密度升高有顯著性差異。 4.外周血MCP-3水平術(shù)后7天假手術(shù)組、血栓組和rhG-CSF組外周血MCP-3水平(96.53±8.21，99.81±7.96，138.44±10.01)明顯升高，各組內(nèi)分別與術(shù)前比較有顯著性差異(p＜0.05)。術(shù)后14天rh

6、G-CSF組外周血MCP-3水平(108.8±9.26)雖有下降，但仍明顯高于術(shù)前水平，且高于假手術(shù)組和血栓組術(shù)后14天外周血MCP-3水平(42.68±0.56，44.82±0.68)，分別與術(shù)前、假手術(shù)組和血栓組比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.血栓中MCP-3 mRNA表達(dá)術(shù)后7和14天，rhG-CSF組血栓中MCP-3mRNA表達(dá)較血栓組顯著升高，兩組間比較有顯著差異(P＜0.01)；術(shù)后14天血栓組MCP-3mRN

7、A表達(dá)與術(shù)后7天比較，顯著下降，而rhG-CSF組無(wú)顯著性變化。 [結(jié)論]1.靜脈壁機(jī)械性損傷聯(lián)合縮窄可穩(wěn)定建立大鼠靜脈血栓模型。 2.rhG-CSF可增加外周血趨化因子MCP-3水平和血栓中MCP-3mRNA的表達(dá)。 3.外周血MCP-3水平增高和血栓中MCP-3 mRNA表達(dá)增加引起血栓中巨噬細(xì)胞聚集增多。提示骨髓細(xì)胞動(dòng)員的大鼠靜脈血栓中MCP-3能促使巨噬細(xì)胞的趨化功能增強(qiáng)(巨噬細(xì)胞歸巢靜脈血栓)，從而加快