正五聚蛋白3在小鼠睪丸支持細胞熱應激恢復過程中的作用及其機制研究.pdf

1、PTX3是在進化過程中高度保守的Pentraxins家族的中的一個多聚體分泌型蛋白。它的表達受到如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、氧化應激、病原體感染一類的應激條件，及IL-1、TNF-α、IL-6等炎癥因子的誘導，并在其中發(fā)揮著重要作用。睪丸內(nèi)溫度比正常體溫低2-4℃。高溫能引起睪丸組織損傷，曲細精管內(nèi)生精細胞排列松散，并且相關(guān)炎癥因子表達上升，精子發(fā)生異常。但是短暫的高溫引起的損傷在溫度恢復后即可自行修復，說明睪丸具有對溫度較為敏感的調(diào)控機制。故應激性

2、蛋白PTX3可能參與高溫后精子發(fā)生的恢復調(diào)節(jié)。利用小鼠睪丸支持細胞體外培養(yǎng)模型，通過在熱應激恢復階段及熱應激前敲低PTX3實驗檢測PTX3的表達和定位變化規(guī)律以及睪丸支持細胞重要功能蛋白（CEBP-β、p-ERK1/2、細胞凋亡和增殖相關(guān)蛋白、BTB相關(guān)蛋白，重要分泌型蛋白GDNF、SCF等）的表達變化規(guī)律，揭示PTX3在支持細胞熱應激恢復階段細胞功能性變化過程中的可能作用和機制。主要實驗結(jié)果如下:
　　(1)短暫高溫處理對睪丸支

3、持細胞PTX3的mRNA和蛋白表達及定位的影響。43℃處理支持細胞1h后恢復正常溫度培養(yǎng)一段時間(0、3、6、12h)，PTX3的mRNA和蛋白表達量在恢復后6h顯著升高，之后逐漸下降，定位分布也發(fā)生變化，從胞質(zhì)向細胞核聚集。
　　(2)短暫高溫處理對睪丸支持細胞PTX3上游調(diào)控因子表達水平的影響。短暫高溫處理(43℃1h)睪丸支持細胞后，PTX3的上游調(diào)控分子CEBP-β及p-ERK1/2的表達都顯著升高。推測短暫高溫處理睪丸引

4、起的精子發(fā)生損傷及其自行修復可能與p-ERK1/2、CEBP-β、PTX3這一調(diào)控通路有關(guān)。
　　(3)短暫高溫處理對睪丸支持細胞凋亡相關(guān)基因表達的影響及與PTX3的可能關(guān)系。進一步的研究發(fā)現(xiàn)高溫誘導支持細胞內(nèi)Bcl-2、CAT的mRNA水平顯著升高，而在熱應激前敲低PTX3后則高溫不能顯著誘導Bcl-2、CAT的表達，同時支持細胞的細胞活性顯著下降，不能正常恢復到高溫前狀態(tài)。我們推測高溫誘導支持細胞內(nèi)PTX3的顯著升高可能與睪丸

5、自身對高溫的抗性和調(diào)整有關(guān)。
　　(4)短暫高溫處理對睪丸支持細胞血睪屏障相關(guān)基因表達的影響及與PTX3的可能關(guān)系。高溫處理支持細胞后，血睪屏障相關(guān)蛋白(N-cadherin、β-catenin、ZO-1)的mRNA水平表達先下降后恢復，而熱應激前干擾PTX3后，高溫誘導的N-cadherin降低則不能恢復，ZO-1表達上升，β-catenin的表達則影響不顯著。這說明高溫誘導的PTX3表達升高也可能與支持細胞的血睪屏障功能的恢復

6、和調(diào)整相關(guān)。
　　(5)短暫高溫處理對睪丸支持細胞分泌性功能蛋白表達的影響及與PTX3的可能關(guān)系。支持細胞分泌的多種重要功能性蛋白，如GDNF、BMP4、SCF、FasL等，在精原干細胞自我更新、分化和凋亡過程中起著重要調(diào)節(jié)作用。熱應激處理后，在恢復階段GDNF和FasL的mRNA表達先升高后下降恢復正常，但是在熱應激前敲低PTX3則兩者下降不能恢復。說明高溫誘導的PTX3表達升高可能也與支持細胞在熱應激后的功能恢復和調(diào)整有關(guān)。<