芹菜素與槲皮素的結(jié)構(gòu)修飾及5-PBDMA對hERG鉀通道的影響.pdf

1、第一部分：芹菜素與槲皮素的結(jié)構(gòu)修飾
　　 第一節(jié) 4',7-二甲基芹菜素合成
　　 目的：探索合成4',7-二甲基芹菜素（DMA）的方法，制備標(biāo)準(zhǔn)品、建立相應(yīng)的檢測方法。
　　 方法：以芹菜素（Apigenin，縮寫API）為原料，通過與甲基化試劑硫酸二甲酯(Me2SO4)反應(yīng)合成DMA并進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。建立DMA的高效液相檢測方法。對試驗(yàn)過程中的加樣方式進(jìn)行改進(jìn)，采用正交試驗(yàn)方法對合成過程中的反應(yīng)物比例、反應(yīng)溫度

2、、反應(yīng)時間三個因素進(jìn)行優(yōu)化。
　　 結(jié)果：合成產(chǎn)物經(jīng)MS，1 H NMR，13C NMR確證其結(jié)構(gòu)為DMA。建立了穩(wěn)定的檢測DMA的HPLC方法。優(yōu)化后的反應(yīng)條件為：反應(yīng)物比例(當(dāng)量比)1∶4∶6 (API∶Me2SO4∶K2CO3）；反應(yīng)溫度25℃；反應(yīng)時間6小時。合成粗產(chǎn)品通過乙醇重結(jié)晶純化，最終DMA的收率為 58.66％，純度高于99％(HPLC峰面積比例)。終產(chǎn)物DMA的熔點(diǎn)為mp 184.0～184.5℃。
　

3、　 結(jié)論：終產(chǎn)物DMA收率終產(chǎn)物純度均較高，本合成路線成本低，操作簡便，條件溫和。
　　 第二節(jié)三甲基芹菜素合成
　　 目的：探索合成三甲基芹菜素（TMA）的方法，制備標(biāo)準(zhǔn)品、建立相應(yīng)的檢測方法。
　　 方法：以芹菜素（Apigenin，縮寫API）為原料，通過與甲基化試劑硫酸二甲酯(Me2SO4)反應(yīng)合成TMA并進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。建立TMA的高效液相檢測方法。對試驗(yàn)過程中的加樣方式進(jìn)行改進(jìn)，采用正交試驗(yàn)方法對合成

4、過程中的反應(yīng)物比例、反應(yīng)溫度、第一階段反應(yīng)時間、第二階段反應(yīng)時間、追加的硫酸二甲酯(Me2SO4)量五個因素進(jìn)行優(yōu)化。
　　 結(jié)果：合成產(chǎn)物經(jīng)MS，1H NMR，13C NMR確證其結(jié)構(gòu)為TMA。建立了穩(wěn)定的檢測TMA的HPLC方法。優(yōu)化后的反應(yīng)條件為：反應(yīng)物比例(當(dāng)量比)1∶6∶9 (API∶Me2SO4∶K2CO3）；反應(yīng)溫度50℃；第一階段反應(yīng)時間6小時，第二階段反應(yīng)時間2小時，追加的硫酸二甲酯(Me2SO4)為2個物質(zhì)的

5、量比。合成粗產(chǎn)品通過乙醇重結(jié)晶純化，最終TMA的收率為 64.13％，純度高于 99％(HPLC峰面積比例)。終產(chǎn)物TMA的熔點(diǎn)為mp 168.2～168.9 ℃,
　　 結(jié)論：運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)方法能夠得到高純度與較高收率的終產(chǎn)物TMA，而且本合成路線成本低廉，操作簡便易行，便于后期工業(yè)化生產(chǎn)。
　　 第三節(jié) 5-苯氧丁基二甲基芹菜素的合成
　　 目的：探索以合成5-苯氧丁基二甲基芹菜素（5-PBDMA）的簡單而安全的

6、方法，以及制備標(biāo)準(zhǔn)品、建立相應(yīng)的檢測方法。
　　 方法：以二甲基芹菜素(DMA)為原料，通過與4-苯氧丁基溴丁烷(4-PBB)反應(yīng)生成5-PBDMA。并對試驗(yàn)過程中的操作步驟進(jìn)行優(yōu)化。
　　 結(jié)果：使用二甲基甲酰胺(DMF)作反應(yīng)溶劑時，能夠達(dá)到合適溫度，使DMA的5位羥基活化從而能夠與4-PBB 反應(yīng)；反應(yīng)物比例(DMA∶5-PBDMA∶K2CO3)(當(dāng)量比)為1∶4∶6；反應(yīng)溫度150℃；反應(yīng)時間2 小時。去除溶劑、

7、水洗得粗產(chǎn)品，經(jīng)無水乙醇重結(jié)晶，終產(chǎn)物5-PBDMA的收率為67.26％ ；純度≥99％ (HPLC 峰面積比例)。合成產(chǎn)物經(jīng)MS，1H NMR，13C NMR確證其結(jié)構(gòu)為TMA。終產(chǎn)物的熔點(diǎn)為mp 147.1～147.9 ℃。
　　 結(jié)論：本合成反應(yīng)為一步合成，操作簡便易行；產(chǎn)物分離純化簡單，產(chǎn)率與純度均保持在較高水平。
　　 第四節(jié) 5-苯氧丁基四甲基槲皮素的合成
　　 目的：探索以合成5-苯氧丁基二甲基槲皮

8、素（5-PBTMQ）的簡單而安全的方法，以及制備標(biāo)準(zhǔn)品、建立相應(yīng)的檢測方法。
　　 方法：以3,3',4',7-四甲基槲皮素(簡稱為TMQ)為原料，通過與4-苯氧丁基溴丁烷(4-PBB)反應(yīng)生成5-PBTMQ。并對試驗(yàn)過程中的操作步驟進(jìn)行優(yōu)化。
　　 結(jié)果：使用二甲基甲酰胺(DMF)作反應(yīng)溶劑時，能夠達(dá)到合適溫度，使TMQ的5位羥基活化從而能夠與4-PBB 反應(yīng)；反應(yīng)物比例(DMA∶TMQ∶K2CO3)(當(dāng)量比)為1∶4

9、∶6；反應(yīng)溫度150℃；反應(yīng)時間2 小時。去除溶劑、水洗得粗產(chǎn)品，經(jīng)無水乙醇重結(jié)晶，終產(chǎn)物5-PBDMA的收率為71.94％ ；純度≥99％ (HPLC 峰面積比例)。終產(chǎn)物的熔點(diǎn)為mp 129.3～130.2 ℃。
　　 結(jié)論：本合成路線產(chǎn)品純度以及產(chǎn)率均較高，而且操作簡單易行。
　　 第二部分 5-PBDMA 對hERG 鉀通道電生理功能的影響
　　 目的：利用穩(wěn)定表達(dá)hERG 鉀通道的HEK293細(xì)胞研究5

10、-PBDMA 對該通道電生理功能的影響，從而評價5-PBDMA在抗心律失常方面的作用以及開發(fā)前景。
　　 方法：在CO2 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)穩(wěn)定表達(dá)hERG 鉀通道的HEK293細(xì)胞，使用0.25％的胰酶消化并獲得單個的HEK293細(xì)胞。應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄hERG 鉀電流并統(tǒng)計分析藥物干預(yù)前后其動力學(xué)變化特征。
　　 結(jié)果：5-PBDMA 可以抑制hERG 尾電流，半數(shù)抑制濃度 IC50 為3.48 μM。5-PBD