siRNA干擾OX40-OX40L通路對(duì)小鼠移植心臟的免疫保護(hù)作用.pdf

1、目的：OX40/OX40L是一對(duì)重要的共刺激分子，主要作用在效應(yīng)T細(xì)胞的晚期應(yīng)答階段，表達(dá)高峰在T細(xì)胞接觸抗原后72-96h，對(duì)T細(xì)胞的長(zhǎng)期存活，更多記憶T細(xì)胞的生成，刺激樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)的分化成熟均有重要的作用。相關(guān)研究提示OX40/OX40L通路很可能在T細(xì)胞特異性免疫中發(fā)揮重要作用并在實(shí)體器官移植的免疫保護(hù)中具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究構(gòu)建了含OX40基因siRNA片段的真核表達(dá)載體pRNAT-U

2、6.1/Neo。觀察活體應(yīng)用siRNA技術(shù)干預(yù)OX40/OX40L通路對(duì)小鼠移植心臟的免疫保護(hù)作用。為進(jìn)一步研究OX40/OX40L通路在移植免疫耐受中的作用和機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并開啟一條新的誘導(dǎo)免疫耐受的途徑。
　　 方法：供體為C57/BL6J(H-2b)，DBA/2(H-2d)，受體為Balb/C(H-2d)，均為雄性，SPF級(jí)，體重25～30g。根據(jù)不同品系的組合及模型建立后胸腺注射物的不同分為以下幾組：(1)主要組織相

3、容性復(fù)合體(MHC)不合(C57/BL6J→Balb/C)：共72只，C57/BL6J和Balb/C各36只，把造模成功后的小鼠隨機(jī)分為3組，每組12只。Ⅰ生理鹽水空白對(duì)照組，ⅡpRNAT-CTL陰性對(duì)照組，ⅢpRNAT-OX40siRNA處理組。各組于手術(shù)后第1，第4天乙醚吸入麻醉后胸腺注射含有陽(yáng)離子聚合物的溶液40μl。(2)次要組織相容性復(fù)合體(mHC)不合(DBA/2→Balb/C)：共72只，DBA/2和Balb/C各36只，

4、把造模成功后的小鼠隨機(jī)分為3組，每組12只。Ⅳ生理鹽水空白對(duì)照組，Ⅴ pRNAT-CTL陰性對(duì)照組，Ⅵ pRNAT-OX40siRNA處理組。術(shù)后處理同(1)。觀察移植心臟和受體存活情況。術(shù)后第7天取移植心臟行病理學(xué)檢查，(2)組取血清檢測(cè)心肌酶譜，取脾臟行RT-PCR和Western Blot檢測(cè)OX40mRNA表達(dá)和OX40膜蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：在C57/BL6J→Balb/C組合中(MHC不合)，pRNAT-OX4

5、0siRNA組移植心臟生存時(shí)間較生理鹽水組和陰性對(duì)照組無(wú)明顯延長(zhǎng)，移植心臟病理學(xué)檢查無(wú)明顯改善。而在DBA/2→Balb/C組合中(mHC不合)，pRNAT-OX40siRNA組小鼠移植心臟生存時(shí)間較生理鹽水組和陰性對(duì)照組顯著延長(zhǎng)，移植心臟中位生存時(shí)間大于100d。病理改變顯著減輕，心肌細(xì)胞間淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，心肌細(xì)胞未見壞死。乳酸脫氫酶(LDH)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌鈣蛋白(Tn)以及脾臟OX40mRNA表達(dá)和OX4