多藥耐藥肝癌細(xì)胞通過(guò)激活TGF-β1-Smad3信號(hào)富集CD133+亞群細(xì)胞.pdf

1、目的:腫瘤干細(xì)胞是腫瘤化療失敗的根源。在乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌中，研究表明化療可以富集腫瘤干細(xì)胞。然而化療富集腫瘤干細(xì)胞的機(jī)制并不明確。CD133分子作為分離腫瘤干細(xì)胞的常用標(biāo)記，已在大量實(shí)體瘤中被證明。CD133+肝癌細(xì)胞已被證實(shí)具有肝癌干細(xì)胞的生物學(xué)特性?；熌芊窀患伟└杉?xì)胞，目前研究報(bào)道較少。我們主要探討化療能否富集肝癌干細(xì)胞(CD133+肝癌亞群細(xì)胞)并初步分析其調(diào)節(jié)肝癌干細(xì)胞的分子機(jī)制。
　　 方法:采用紫杉醇(Pa

2、clitaxel，PTX)藥物大劑量沖擊間歇誘導(dǎo)法建立穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞(Huh7.5.1/PTX)。CCK-8試驗(yàn)檢測(cè)耐藥細(xì)胞及其親本細(xì)胞的藥物敏感性。Western Blot(WB)和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)親本細(xì)胞、耐藥細(xì)胞及TGFβ1、TGF-β1中和抗體、Smad3特異性抑制劑(SIS3)作用后的Smad3活性及CD133的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:歷時(shí)6個(gè)月建成Huh7.5.1/PTX細(xì)胞株，其對(duì)PTX高度耐藥，耐藥指

3、數(shù)為15.70，且對(duì)順鉑、5-氟尿嘧啶、阿霉素、絲裂霉素及吉西他濱等化療藥物有不同程度的交叉耐藥性。FCM結(jié)果顯示Huh7.5.1/PTX細(xì)胞相比親本細(xì)胞具有更高的CD133+細(xì)胞比列(69.9％vs19.4%，p＜0.01)：TGF-β1作用Huh7.5.1后CD133+細(xì)胞比例增加(35.3%vs18.6%，p＜0.01)，加入SIS3作用后CD133細(xì)胞比例減少(15.5%vs35.3%，p＜0.01)：SIS3作用Huh7.5.

4、1和Huh7.5.1/PTX細(xì)胞后CD133+細(xì)胞出現(xiàn)明顯的減少(11.9%vs18.6%，p＜0.05；29.9%vs69.3%，p＜0.01);TGF-β1中和抗體作用Huh7.5.1/PTX細(xì)胞后CD133＇細(xì)胞比例減少(39.5%vs53.6%，p＜0.01)。WB結(jié)果證實(shí)了FCM的結(jié)果，顯示Huh7.5.1/PTX細(xì)胞相比原代細(xì)胞高表達(dá)CD133、TGF-β1及磷酸化的Smad3表達(dá)增加；TGF-β1作用Huh7.5.1后CD