廣西產(chǎn)圓斑蝰蛇蛇毒中FX激活酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、FX激活酶能特異地激活血液中的凝血因子X(jué)(FX)，促進(jìn)血液凝固，在臨床診斷，新藥物的開(kāi)發(fā)以及蛋白結(jié)構(gòu)和功能的科學(xué)研究等眾多領(lǐng)域都有巨大應(yīng)用價(jià)值。蛇毒中富含各種作用于凝血系統(tǒng)諸多環(huán)節(jié)的蛋白酶和多肽，這些多肽和蛋白質(zhì)在抗凝，抗血栓和止血等方面都有廣泛的應(yīng)用。蛇毒是FX激活酶的重要來(lái)源之一，作為探討其開(kāi)發(fā)利用的第一步，我們從廣西產(chǎn)圓斑蝰蛇蛇毒分離純化出高純度的FX激活酶，并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行了研究。本文先后經(jīng)HemagelAD-200凝膠過(guò)濾，DE

2、AE-52陰離子交換層析和CM-23陽(yáng)離子交換層析等方法從廣西產(chǎn)圓斑蝰蛇蛇毒中分離純化出高純度的FX激活酶；用發(fā)色底物(F3301)對(duì)其催化特異性進(jìn)行了鑒定；用非還原SDS-PAGE和HPLC兩種方法對(duì)所得FX激活酶的純度進(jìn)行了測(cè)定；通過(guò)還原性SDS-PAGE確定其亞基組成和分子量大小；以血液凝固時(shí)間進(jìn)行活性鑒定，并研究了溫度、pH值對(duì)活性的影響。結(jié)果：從廣西圓斑蝰蛇蛇毒中分離出電泳純的特異性FX激活酶，純度達(dá)95％以上，得率約12％；

3、非還原電泳中，為單一條帶，分子量為89KD；還原性電泳中，有四條帶，分子量分別為61KD、22KD、17KD、15KD；紫外掃描發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)X激活酶在278nm處有最大吸收；通過(guò)研究溫度和PH對(duì)酶活性的影響發(fā)現(xiàn)改酶在50℃以下和pH在6.0-9.0時(shí)穩(wěn)定性較好；最適溫度67-72℃，最適PH為7.5；反復(fù)凍融10次對(duì)活性無(wú)明顯影響。經(jīng)過(guò)對(duì)純化得到的FX激活酶分析發(fā)現(xiàn)，廣西圓斑蝰蛇蛇毒中分離出的FX激活酶分子量為115kd，有4個(gè)亞基經(jīng)過(guò)二硫