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1、耗散結(jié)構(gòu)理論在物理、化學(xué)、生物乃至社會(huì)等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用,尤其是近年來(lái)在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用更是得到了重視,如在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控、免疫系統(tǒng)防御與殺傷調(diào)控、胚胎發(fā)育調(diào)控等研究。在本論文中,我們以耗散結(jié)構(gòu)理論為指導(dǎo),開(kāi)展了人嗜中性粒細(xì)胞內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(磷酸)[Hydrogenated Nicotinamide Adenine Dinucleotide(Phosphate),NAD(P)H]和鈣(Ca2+)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的研究。<
2、br> 人嗜中性粒細(xì)胞是免疫系統(tǒng)重要組成之一,其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)動(dòng)力學(xué)過(guò)程具有耗散現(xiàn)象,如已發(fā)現(xiàn)NAD(P)H和Ca2+信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程呈現(xiàn)時(shí)空有序性的耗散模式。目前,活體細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中時(shí)空信息的有效獲取主要依賴于活體熒光成像技術(shù)。因此我們構(gòu)建了顯微弱光高時(shí)空分辨率成像系統(tǒng),可實(shí)現(xiàn)毫秒級(jí)信號(hào)連續(xù)采集,同時(shí)保證空間信息的獲取。依托該系統(tǒng),本論文在單個(gè)嗜中性粒細(xì)胞水平上研究了NAD(P)H自體熒光的探測(cè)問(wèn)題,最終克服了NAD(P)H
3、自體熒光強(qiáng)度較弱、易漂白淬滅,以及紫外激發(fā)光對(duì)細(xì)胞光毒性影響等難題,實(shí)現(xiàn)了該熒光信號(hào)在單個(gè)嗜中性粒細(xì)胞水平上的實(shí)時(shí)、快速、可視化成像,從而為研究單個(gè)嗜中性粒細(xì)胞內(nèi)NAD(P)H信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)動(dòng)力學(xué)過(guò)程中的時(shí)空信息提供高時(shí)空分辨實(shí)驗(yàn)平臺(tái)和有效技術(shù)支持。
在此基礎(chǔ)上,我們系統(tǒng)地研究了外源性一氧化氮(Nitric Oxide,NO)對(duì)佛波酯(Phorbol12-Myristate13-Acetate,PMA)激活的人嗜中性粒細(xì)胞內(nèi)Ca
4、2+動(dòng)力學(xué)過(guò)程的影響。作為一種重要免疫信使分子,NO對(duì)嗜中性粒細(xì)胞趨化、粘附、呼吸爆發(fā)等生理功能的行使發(fā)揮著重要作用。同時(shí),PMA是蛋白激酶C(ProteinKinase C,PKC)的特異性激動(dòng)劑,可通過(guò)激活NAD(P)H氧化酶誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)。我們的研究結(jié)果首次證明了外源性:NO是通過(guò)亞硝基化反應(yīng)途徑誘導(dǎo)人嗜中性粒細(xì)胞內(nèi)IP3受體敏感的鈣庫(kù)釋放,而不是通過(guò)傳統(tǒng)的NO-sGC—cGMP信號(hào)途徑,鈣庫(kù)釋放可誘導(dǎo)明顯的胞外鈣內(nèi)流,
5、且整個(gè)過(guò)程是依賴于PMA誘導(dǎo)人嗜中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)。該發(fā)現(xiàn)為臨床上使用外源性NO治療相關(guān)免疫類疾病提供了嶄新的思考視角及實(shí)驗(yàn)支持,也為研究細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)耗散現(xiàn)象提供了實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀?br> 此外,我們還應(yīng)用PMA對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型的大鼠滑膜細(xì)胞進(jìn)行了一定研究。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制與嗜中性粒細(xì)胞異常增殖密切相關(guān)。我們利用原子力顯微成像術(shù),使用PMA刺激滑膜細(xì)胞模擬炎癥過(guò)程,結(jié)果顯示PMA可以誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎模型的大鼠滑膜細(xì)胞骨架的明
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