αD-,3-對(duì)老年雄性大鼠頜骨、股骨RANK-RANKL-OPG的影響.pdf

1、研究背景：
　　 骨質(zhì)疏松癥[osteoprosis,(op)]是一種以骨量減少骨的微結(jié)構(gòu)破壞為特征的全身性骨骼疾病，伴有脆性減少，容易發(fā)生骨折。RANK/RANKL/OPG系統(tǒng)被認(rèn)為是破骨細(xì)胞分化成熟最重要的信號(hào)通路，是四肢骨發(fā)生OP最根本的原因。
　　 但該通路是否同樣啟動(dòng)了口腔頜面部的OP，以及他們與牙槽骨骨量、骨密度的關(guān)系如何，尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。女性由于絕經(jīng)后雌激素缺乏更易發(fā)生OP而受到更多關(guān)注，但是隨著老年社會(huì)的

2、到來(lái)，男性O(shè)P發(fā)病率逐漸升高，老年男性O(shè)P日益成為嚴(yán)重的世界性問(wèn)題。雄激素缺乏是男性O(shè)P發(fā)生重要原因，但雄激素與口腔頜面部骨密度、骨量的關(guān)系如何未見(jiàn)報(bào)道。雄激素對(duì)頜骨RANK/RANKL/OPG系統(tǒng)mRNA的表達(dá)的影響是否與股骨一致，也不清楚?？谇活M面部骨質(zhì)疏松造成面容塌陷，牙易松動(dòng)脫落，牙槽骨萎縮，嚴(yán)重影響患者咀嚼、發(fā)音和美觀(guān)功能。即使采用義齒修復(fù)也因缺乏足夠的骨組織支持導(dǎo)致修復(fù)失敗，尋找藥物治療的方法減緩骨的吸收增加骨量一直是臨床上

3、迫切需要解決的問(wèn)題。而αD3作為骨質(zhì)疏松的基礎(chǔ)用藥，它對(duì)RANK/RANKL/OPG的影響如何？我們可否把它用于男性口腔頜面部牙槽骨OP的防治？
　　 因此有必要建立自然衰老的雄性大鼠模型闡述雄激素的改變對(duì)口腔頜面部骨骼骨密度、骨形態(tài)計(jì)量的影響，及RANK/RANKL/OPG信號(hào)途徑是否啟動(dòng)口腔頜面部OP，評(píng)價(jià)αD3對(duì)老年大鼠頜骨RANK/RANKL/OPG表達(dá)的影響及骨量、骨密度的作用。
　　 第一章 RANKL、OP

4、G在不同年齡男性下頜骨的表達(dá)
　　 目的：觀(guān)察RANKL、OPG在不同年齡男性下頜骨的表達(dá)
　　 方法：選用湘雅醫(yī)院2008.5-2009.7口腔門(mén)診拔牙去骨及病房正頜外科手術(shù)男性病人46例。排除牙周病、影響骨代謝的全身系統(tǒng)疾病及藥物服用史，無(wú)抽煙、酗酒不良生活習(xí)慣。分為3組，其中青少年組10-29歲，17人，中年組30-59歲，15人，老年組60-89歲，14人。采用RT-PCR方法，觀(guān)察下頜骨RANKL、OPG的表達(dá)

5、。
　　 結(jié)果：
　　 1、與青少年組相比，中年組和老年組RANKL mRNA分別升高2.1倍和5.3倍，OPGmRNA分別升高3.3倍和4.8倍，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 2、RANKL和OPG值與年齡正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1、男性下頜骨RANKL mRNA和OPG mRNA水平隨年齡明顯升高，RANKL和OPG值與年齡正相關(guān)。
　　 2、中年組頜骨改建活躍，與青少年

6、組相比，骨形成大于骨吸收；
　　 3、老年組頜骨吸收與骨形成均處與低水平，骨吸收大于骨形成。
　　 第二章αD3對(duì)老年大鼠生化指標(biāo)、骨密度、骨形態(tài)計(jì)量的影響
　　 目的：通過(guò)觀(guān)察不同月齡大鼠生化指標(biāo)、骨密度及骨形態(tài)計(jì)量的變化，研究雄激素的改變對(duì)大鼠的作用及αD3對(duì)老年大鼠的影響。方法：選用6周齡、6月齡、24月齡、24月齡＋αD3組Wistar大鼠分為甲、乙、丙、丁組四組，每組15只。其中丁組為24月齡＋αD3組

7、，按0.05ug/kg/d－1灌胃，隔天一次，每周3次，連續(xù)10周。生化指標(biāo)測(cè)定：頸總動(dòng)脈取血分離上層血清測(cè)ALP、BGP、T、TRACP5b；采用雙能X線(xiàn)測(cè)定右側(cè)股骨、頜骨骨密度；骨形態(tài)計(jì)量：采用右側(cè)股骨、頜骨EDTA脫鈣，在Motic image advanced6.0型圖像系統(tǒng)測(cè)量骨小梁面積、骨小梁厚度、骨小梁間距等。
　　 結(jié)果：
　　 生化指標(biāo)：
　　 1、T水平隨月齡增長(zhǎng)明顯下降，但組間差異無(wú)顯著性(

8、p＞0.05)；
　　 2、ALP、BGP隨月齡增長(zhǎng)明顯下降。與6周相比，6月齡、24月齡、24月＋αD3組差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 3、TRACP5b水平隨月齡增長(zhǎng)明顯升高，24月及24月＋αD3較6月組差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 4、BGP與ALP正相關(guān)(r＝0.58)，與TRACP5b負(fù)相關(guān)(r＝－0.49)。
　　 5、Ca、P變化不大，各組間差異無(wú)顯著性(p＞0.05)。<

9、br>　　 骨密度指標(biāo)：
　　 1、股骨、頜骨骨密度隨著月齡增長(zhǎng)增加；
　　 2、24月＋αD3較24月組骨密度有增加，但差異無(wú)顯著性(p＞0.05)。
　　 骨形態(tài)計(jì)量指標(biāo)：
　　 1、股骨、頜骨隨月齡增長(zhǎng)，骨小梁面積、寬度增加；
　　 2、與6周組頜骨破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)相比，6月齡、24月齡、24月＋αD3組差異有顯著性(p＜0.05)；與6月組股骨破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)比，6周組、24月齡、24月＋αD3

10、組差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 3、頜骨24月組較6月組比較，骨小梁寬度增加53％，但骨小梁間隔增加123％；
　　 4、24月＋αD3組較24月齡頜骨骨小梁面積增加33％。
　　 結(jié)論：
　　 1、隨月齡增長(zhǎng)睪酮水平明顯下降。
　　 2、隨月齡增長(zhǎng)骨形成生化指標(biāo)也明顯下降，骨吸收指標(biāo)明顯升高。
　　 3、骨吸收與骨形成在老年組處于低水平。
　　 4、藥物αD3有促進(jìn)頜骨骨

11、量的作用。
　　 第三章αD3對(duì)老年大鼠頜骨、股骨RANK/RANKL/OPG的影響
　　 目的：觀(guān)察RANK/RANKL/OPG在不同月齡大鼠股骨、頜骨的表達(dá)，探討頜骨骨質(zhì)疏松與全身骨質(zhì)疏松的一致性。探討αD3對(duì)老年大鼠RANKLmRNA及OPGmRNA表達(dá)的影響。
　　 方法：選用6周齡、6月齡、24月齡、24月齡＋αD3組Wistar大鼠分為甲、乙、丙、丁四組，每組15只。其中丁組為24月齡＋αD3組，按0

12、.05ug/kg/d－1灌胃，隔天一次，每周3次。連續(xù)10周。取左側(cè)股骨遠(yuǎn)中干骺端1/2和左側(cè)磨牙段下頜骨采用RT-PCR測(cè)RANKL及OPG的mRNA的表達(dá)并免疫組化分析。
　　 結(jié)果：
　　 股骨RT-PCR的結(jié)果：
　　 1、RANKL mRNA值隨月齡增長(zhǎng)明顯。與6周組相比，6月和24月組RANKLmRNA分別增加6.0倍和7.3倍，組間差異有顯著性(p＜0.05)，OPGmRNA值隨月齡逐步增加，組間差

13、異無(wú)顯著性(p＞0.05)；
　　 2、24月＋αD3組與24月組比較RANKL mRNA和OPG mRNA升高，但差異無(wú)顯著性(p＞0.05)；RANK明顯降低，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 3、RANKL/OPG值隨月齡增長(zhǎng)明顯升高，6月、24月組與6周組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 頜骨RT-PCR的結(jié)果：
　　 1、頜骨RANKL mRNA隨月齡增長(zhǎng)升高，與6周組相比，6月齡

14、和24月齡RANKLmRNA分別增加6.2倍和6.4倍，組間差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 2、與6月組比較，24月組RANKL/OPG比值隨月齡增長(zhǎng)下降。
　　 3、24月＋αD3組與24月組比較RANKL mRNA和OPG mRNA升高，但差異無(wú)顯著性(p＞0.05)；RANK明顯降低，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 免疫組化的結(jié)果：
　　 1、RANKL、OPG表達(dá)于軟骨和成骨細(xì)胞胞漿和

15、胞核；
　　 2、6周組頜骨、股骨OPG表達(dá)高于6月組；
　　 3、24月齡＋αD3干預(yù)組OPG表達(dá)較24月組增強(qiáng)；
　　 結(jié)論：
　　 1、隨著月齡增加，股骨RANKLmRNA明顯升高，OPGmRNA緩慢上升，RANKL/OPG值也隨月齡增加，有利于骨的吸收和轉(zhuǎn)換；
　　 2、隨月齡增長(zhǎng)，頜骨RANKL mRNA水平增加。RANKL/OPG值隨月齡增長(zhǎng)24月組較6月組卻下降，說(shuō)明頜骨骨質(zhì)疏松與全