Neuritin誘導(dǎo)后的骨髓源性神經(jīng)元樣細胞的功能檢測.pdf

1、目的：
　　 1.利用已構(gòu)建的Neuritin酵母表達系統(tǒng)大量誘導(dǎo)表達Neuritin蛋白，并進行純化及鑒定；
　　 2.對Neuritin誘導(dǎo)的骨髓源性神經(jīng)元樣細胞進行功能檢測，明確Neuritin對骨髓基質(zhì)細胞（MSCs）的定向分化的作用。
　　 方法：
　　 1.Neuritin蛋白的誘導(dǎo)表達及純化鑒定：采用甲醇誘導(dǎo)畢赤酵母表達Neuritin蛋白，采取硫酸銨飽和沉淀、Ni-NAT親和層析、透析、濃

2、縮等步驟對表達產(chǎn)物進行純化，SDS-PAGE和Westrern blot鑒定產(chǎn)物；
　　 2.對Neuritin誘導(dǎo)的骨髓源性神經(jīng)元樣細胞進行功能檢測：（1）誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細胞的電生理檢測：采用膜片鉗技術(shù)觀察分化前后的膜特性變化以及膜離子通道的情況。（2）誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細胞分泌神經(jīng)遞質(zhì)的檢測：用薄層層析法檢測神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺。（3）誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細胞的細胞間突觸聯(lián)系的檢測，利用免疫熒光染色檢測突觸素。
　　 結(jié)果

3、：
　　 1.誘導(dǎo)表達的Neuritin蛋白經(jīng)純化鑒定顯示：人Neuritin酵母表達產(chǎn)物的分子量約為11Kda左右；經(jīng)Western-blot證實為Neuritin，且具有一定的免疫活性。
　　 2.Neuritin誘導(dǎo)的骨髓源性神經(jīng)元樣細胞的功能檢測結(jié)果顯示：（1）電生理檢測分化前后的膜特性有顯著差異，并記錄到外向延遲整流K+電流和內(nèi)向整流K+電流。（2）誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細胞有5-羥色胺的分泌。（3）突觸素檢測結(jié)果為