呼吸道合胞病毒感染患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞P2X7受體表達(dá).pdf

1、目的：
　　通過(guò)使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)呼吸道合胞病毒感染患兒喘息組與無(wú)喘息組（對(duì)照組）外周血單個(gè)核細(xì)胞P2X7受體表達(dá)的情況，探討兒童呼吸道合胞病毒感染后，P2X7受體表達(dá)在喘息患兒與無(wú)喘息癥狀患兒之間是否有差異及其意義。
　　對(duì)象：
　　選取2014年6月至2015年3月于長(zhǎng)治市人民醫(yī)院3月齡至3歲住院患兒，病例均符合第七版《兒科學(xué)》小兒呼吸系統(tǒng)疾?。ㄖ夤芟猓┰\斷標(biāo)準(zhǔn)，排除心源性哮喘、百日

2、咳、支氣管異物等原因引起的喘息。所選患兒入組前近兩周內(nèi)均未使用過(guò)糖皮質(zhì)激素。實(shí)驗(yàn)中使用直接免疫熒光法檢測(cè)RSV抗原。將符合條件的患兒根據(jù)有無(wú)明顯喘息分為兩組，每組各有30名，分別記錄各患兒年齡、性別，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析喘息組與無(wú)喘息組無(wú)區(qū)別。
　　材料和方法：
　　選擇呼吸道合胞病毒陽(yáng)性喘息患兒與無(wú)喘息癥狀患兒各30例，采集入組患兒新鮮外周靜脈血，用外周血淋巴細(xì)胞提取液提取分離外周血淋巴細(xì)胞，采用經(jīng)典方法提取細(xì)胞RNA，檢測(cè)提取結(jié)

3、果并對(duì)RNA濃度進(jìn)行檢測(cè)，按照PrimeScript TMⅡ1st Strand cDNA Synthes說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后樣本進(jìn)行PCR反應(yīng)，為提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，以β-Actin為內(nèi)參照，引物基因序列由Primer5.0軟件設(shè)計(jì)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　經(jīng)RT-PCR法得到擴(kuò)增產(chǎn)物，產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)攝圖，分別記錄兩組患兒中P2X7受體基因mRNA表達(dá)的灰度值，記錄內(nèi)參照基因mRNA表達(dá)的

4、灰度值，以內(nèi)參照與喘息組或無(wú)喘息組灰度值的比值代表P2X7受體基因mRNA的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)描述，喘息組患兒P2X7受體mRNA表達(dá)水平為1.19±0.35，而對(duì)照組P2X7受體mRNA表達(dá)水平為0.56±0.15，喘息組與無(wú)喘息組間比較采用F檢驗(yàn)，以α＝0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　研究結(jié)論：
　　1、呼吸道合胞病毒感染患兒喘息組與對(duì)照組比較P2X7受體表達(dá)增高；
　　2、P2X7受體參與兒童呼吸道合胞