PLC-γ1參與人牙周膜細胞鈣離子通道機械信號轉(zhuǎn)導機制的研究.pdf

1、目的：為了解機械力學信號使牙周膜細胞產(chǎn)生生物學效應的可能的機制，本課題對牽張作用下人牙周膜細胞Ca2+通道的信號轉(zhuǎn)導途徑進行深入研究，為口腔修復臨床對牙齒合理施力以及咬合創(chuàng)傷、牙周病的防治提供實驗依據(jù)。 方法：通過原代和傳代培養(yǎng)獲得性狀穩(wěn)定的實驗用人牙周膜細胞，利用動態(tài)機械應變細胞加載裝置對人牙周膜細胞進行1％、10％和20％動態(tài)牽張應變加載，并加載不同時間，通過流式細胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡對細胞進行Ca2+濃度和PLC-γ

2、(磷脂酶C-γ1)水平的檢測。 結(jié)果：1.體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞經(jīng)形態(tài)學觀察和免疫組化檢測鑒定，可明確細胞為間充質(zhì)來源，符合人牙周膜細胞特征。4-8代的細胞性狀穩(wěn)定，適宜于進行細胞力學加載實驗。2.流式細胞儀對細胞內(nèi)游離Ca2+的檢測發(fā)現(xiàn)：在60min內(nèi)，隨著牽張應變時間的增加，胞內(nèi)游離Ca2+濃度逐漸升高，60min時各個應變組的胞內(nèi)Ca2+濃度達到該組的峰值，以后隨著加載時間的延長，Ca2+濃度逐漸下降，至120min時降至

3、對照組水平。激光掃描共聚焦顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)：對照組和各牽張應變組都可見Ca2+熒光表達，但加載60min組細胞內(nèi)熒光明顯增強。3.流式細胞儀對細胞內(nèi)PLC-γ1水平的檢測發(fā)現(xiàn)：在加載牽張應變的初期，細胞內(nèi)的PLC-γ1水平維持較低水平，隨著牽張應變加載時間的延長，牙周膜細胞內(nèi)的PLC-γ1水平逐漸升高。50min時PLC-γ1水平達到了各個應變組的最高值。隨著加載時間的繼續(xù)延長，60min時各應變組的PLC-γ1水平都有所下降。激光掃描共