大鼠牙胚根端條件培養(yǎng)基對(duì)人牙周膜干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)樣細(xì)胞分化的作用.pdf

1、牙骨質(zhì)是覆蓋在牙根表面的一層硬結(jié)締組織,是建立牙周膜與牙根之間附著的重要結(jié)構(gòu)。炎癥情況或異常機(jī)械刺激下會(huì)引起牙骨質(zhì)的破壞,甚至導(dǎo)致不可逆性牙根吸收。牙齒發(fā)育完成以后,成牙骨質(zhì)細(xì)胞來源有限。牙周膜干細(xì)胞作為一類具有自我更新和多向分化特性的早期未分化細(xì)胞,是成牙骨質(zhì)細(xì)胞來源的理想選擇。研究表明,microRNAs在干細(xì)胞的自我更新和分化中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)利用大鼠牙胚根端條件培養(yǎng)基,誘導(dǎo)人牙周膜干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)樣細(xì)胞分化,以期為后續(xù)

2、研究牙周膜干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化過程中microRNAs的調(diào)控作用提供研究基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究大鼠牙胚根端條件培養(yǎng)基對(duì)人牙周膜干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)樣細(xì)胞分化的作用。
　　實(shí)驗(yàn)方法:免疫磁珠法分選出STRO-1陽性的牙周膜干細(xì)胞,利用克隆形成效率實(shí)驗(yàn)及免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)分選后的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。制作牙胚根端條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)牙周膜干細(xì)胞分化。對(duì)誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、Alizerin Red Solution染色、免疫細(xì)胞化學(xué)

3、染色、ALP活性檢測(cè)以及Real-timePCR檢測(cè)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:克隆形成效率分析顯示牙周膜干細(xì)胞呈克隆式生長;免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,免疫磁珠分選的陽性細(xì)胞均能表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物STRO-1和血管周圍細(xì)胞標(biāo)志物CD146;所有細(xì)胞Vimentin蛋白表達(dá)陽性而Cytokeratin蛋白表達(dá)陰性。Alizerin Red Solution染色顯示,誘導(dǎo)組細(xì)胞表面出現(xiàn)大量礦化結(jié)節(jié);免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,誘導(dǎo)后的細(xì)胞能夠表達(dá)