Notch及相關信號傳導體系對細胞增殖及分化的調控作用.pdf

1、目的：1、Notch信號通路、mTOR通路、Akt-ERK信號通路抑制劑及其聯(lián)合應用后對初診白血病中干/祖細胞的克隆形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化水平、分化方向、凋亡水平、細胞增殖周期以及白血病干細胞數(shù)量的影響。2、探討調控造血干細胞(HSC)、LSC自我更新及分化增殖的信號調節(jié)機制。3、探索最佳的信號通路抑制劑及其聯(lián)合應用方案以最大限度的抑制白血病細胞增殖，清除LSC，促進正常HSC的自我更新。 方法：1、經淋巴細胞分

2、離液分離初診患者骨髓中單個核細胞(MNC)與Notch信號通路抑制劑DAPT、mTOR通路抑制劑雷帕霉素、Akt-ERK信號通路抑制劑Ly294002分組共培養(yǎng)。2、干細胞培養(yǎng)測定克隆形成及自我更新能力，MTT檢測細胞增殖水平。瑞特一姬姆薩染色觀察細胞形態(tài)。3、流式細胞術檢測細胞表面CD34；CD38；CD123；CD117；CD11b；CD14的表達水平。4、流式細胞術檢測細胞凋亡及細胞周期。 結果：1、研究結果顯示DAPT、

3、雷帕霉素、Ly294002對細胞增殖、克隆形成及自我更新能力均有抑制作用(P<0.05有顯著統(tǒng)計學差異)。其中DAPT與Ly294002聯(lián)合應用對細胞自我更新能力的抑制效果優(yōu)于單用DAPT。2、DAPT、雷帕霉素可減少CD34+細胞比例。DAPT、雷帕霉素、Ly294002均可顯著減少CD117+細胞比例，其中DAPT、雷帕霉素聯(lián)用效果優(yōu)于單用一種藥物。3、CD14、CD11b作為單核細胞標志，未發(fā)現(xiàn)信號通路抑制劑的應用能促進白血病細胞

4、向單核細胞系分化。4、DAPT的應用可顯著減少CD34+CD38-、CD123+胞群的數(shù)量，而且DAPT與Ly294002聯(lián)合應用的效果優(yōu)于單用DAPF。5、DAFT與Ly294002聯(lián)合應用可誘導細胞早期凋亡及總凋亡增多。6、單用DAPT以及DAPT與Ly294002聯(lián)合應用可減少S期細胞數(shù)量。 結論：1、Notch、Akt-ERK、mTOR信號通路對白血病細胞，甚至是白血病干細胞的增殖、克隆形成、自我更新、凋亡、細胞周期、原