線粒體18kDa轉(zhuǎn)位分子蛋白(TSPO)在膠質(zhì)瘤細胞中的作用及其機理的研究.pdf

1、目的：
　　 線粒體18kDa轉(zhuǎn)位分子蛋白(TSPO)是一種新的膠質(zhì)瘤標記,為線粒體凋亡途徑中必備的因子,當被外源性配體或藥物激活后,可以促進活性氧簇(ROS)和細胞色素C的產(chǎn)生,增加滲透性轉(zhuǎn)運孔(MPTP)的通透性,誘導細胞凋亡。以TSPO為研究靶點,通過調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑可以達到抑制膠質(zhì)瘤生長的目的。本研究通過檢測TSPO在膠質(zhì)瘤中的表達情況,分析其在膠質(zhì)瘤細胞中的作用和機理,并進一步探討以TSPO為靶點膠質(zhì)瘤的治療。研究分

2、為三個部分:①TSPO在人腦膠質(zhì)瘤組織標本及U251細胞中的表達;②TSPO在人腦膠質(zhì)瘤U251細胞中的作用及其機理;③以TSPO為靶點膠質(zhì)瘤治療的研究。
　　 方法：
　　 第一部分:采用免疫組化法檢測不同級別人腦膠質(zhì)瘤組織標本中TSPO的表達。在人腦膠質(zhì)瘤U251細胞中,采用Westernblotting和免疫熒光染色法檢測TSPO的表達情況。第二部分:應用終濃度為100、50、25、12.5、6.25、0μmol/

3、Lpk11195作用于U251細胞,MTT比色法檢測細胞增殖活性;臺盼蘭染色法檢測細胞死亡率;Hoechst33342染色和流式細胞儀法檢測細胞凋亡;Westernblotting和免疫熒光法檢測TSPO表達;線粒體功能檢測包括:膜電位(Jc-1染色法)、ATP含量(熒光素酶法);線粒體ROS檢測包括:DCF法(DCFH-DA探針)、GSH(GSH試劑盒)。第三部分:以氯丙咪嗪作為候選藥物,用MTT比色法檢測不同濃度的氯丙咪嗪對U251

4、細胞增殖活性的影響,根據(jù)結(jié)果選取二個不同濃度作相關(guān)指標的檢測,包括細胞形態(tài)學變化、細胞死亡計數(shù)、細胞凋亡、TSPO的表達、線粒體功能等,方法同上。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分:在人腦膠質(zhì)瘤U251細胞中,TSPO亦有明顯表達;在不同級別的人腦膠質(zhì)瘤組織標本中TSPO均有明顯的表達,其表達量的多少與腫瘤的惡性程度有一定的相關(guān)性。第二部分:pk11195組膠質(zhì)瘤U251細胞生長旺盛、增殖明顯,且凋亡數(shù)減少;TSPO表達下降

5、;細胞內(nèi)ROS降低、膜電位升高、ATP增加,且在一定范圍內(nèi)與藥物濃度成正比。第三部分:氯丙咪嗪組膠質(zhì)瘤U251細胞生長明顯抑制,凋亡增加;TSPO表達增加;細胞內(nèi)ROS升高、膜電位降低、ATP減少,且在一定范圍內(nèi)與藥物濃度成正比。
　　 結(jié)論：
　　 ①TSPO在人腦膠質(zhì)瘤中存在廣泛的表達,是膠質(zhì)瘤新的標記。②在人腦膠質(zhì)瘤中,TSPO可以通過調(diào)節(jié)線粒體功能,促進腫瘤細胞凋亡。③三環(huán)類抗抑郁藥氯丙咪嗪是以TSPO為靶點而抑