線粒體18kDa轉(zhuǎn)位分子蛋白(TSPO)在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用及其機(jī)理的研究.pdf

1、目的：
　　 線粒體18kDa轉(zhuǎn)位分子蛋白(TSPO)是一種新的膠質(zhì)瘤標(biāo)記,為線粒體凋亡途徑中必備的因子,當(dāng)被外源性配體或藥物激活后,可以促進(jìn)活性氧簇(ROS)和細(xì)胞色素C的產(chǎn)生,增加滲透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔(MPTP)的通透性,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。以TSPO為研究靶點(diǎn),通過調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑可以達(dá)到抑制膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的目的。本研究通過檢測(cè)TSPO在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況,分析其在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用和機(jī)理,并進(jìn)一步探討以TSPO為靶點(diǎn)膠質(zhì)瘤的治療。研究分

2、為三個(gè)部分:①TSPO在人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本及U251細(xì)胞中的表達(dá);②TSPO在人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中的作用及其機(jī)理;③以TSPO為靶點(diǎn)膠質(zhì)瘤治療的研究。
　　 方法：
　　 第一部分:采用免疫組化法檢測(cè)不同級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中TSPO的表達(dá)。在人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中,采用Westernblotting和免疫熒光染色法檢測(cè)TSPO的表達(dá)情況。第二部分:應(yīng)用終濃度為100、50、25、12.5、6.25、0μmol/

3、Lpk11195作用于U251細(xì)胞,MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性;臺(tái)盼蘭染色法檢測(cè)細(xì)胞死亡率;Hoechst33342染色和流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Westernblotting和免疫熒光法檢測(cè)TSPO表達(dá);線粒體功能檢測(cè)包括:膜電位(Jc-1染色法)、ATP含量(熒光素酶法);線粒體ROS檢測(cè)包括:DCF法(DCFH-DA探針)、GSH(GSH試劑盒)。第三部分:以氯丙咪嗪作為候選藥物,用MTT比色法檢測(cè)不同濃度的氯丙咪嗪對(duì)U251

4、細(xì)胞增殖活性的影響,根據(jù)結(jié)果選取二個(gè)不同濃度作相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè),包括細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞死亡計(jì)數(shù)、細(xì)胞凋亡、TSPO的表達(dá)、線粒體功能等,方法同上。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分:在人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中,TSPO亦有明顯表達(dá);在不同級(jí)別的人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中TSPO均有明顯的表達(dá),其表達(dá)量的多少與腫瘤的惡性程度有一定的相關(guān)性。第二部分:pk11195組膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛、增殖明顯,且凋亡數(shù)減少;TSPO表達(dá)下降

5、;細(xì)胞內(nèi)ROS降低、膜電位升高、ATP增加,且在一定范圍內(nèi)與藥物濃度成正比。第三部分:氯丙咪嗪組膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞生長(zhǎng)明顯抑制,凋亡增加;TSPO表達(dá)增加;細(xì)胞內(nèi)ROS升高、膜電位降低、ATP減少,且在一定范圍內(nèi)與藥物濃度成正比。
　　 結(jié)論：
　　 ①TSPO在人腦膠質(zhì)瘤中存在廣泛的表達(dá),是膠質(zhì)瘤新的標(biāo)記。②在人腦膠質(zhì)瘤中,TSPO可以通過調(diào)節(jié)線粒體功能,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。③三環(huán)類抗抑郁藥氯丙咪嗪是以TSPO為靶點(diǎn)而抑