胰腺癌細胞平衡核苷載體及將其阻斷后對5-FU攝取的影響.pdf

1、胰腺癌細胞平衡核苷載體及將其阻斷后對5-FU攝取的影響研究生:王晶敏導師:劉勝利東南大學醫(yī)學院核苷載體ENTs在腫瘤細胞膜表面的數(shù)量可能與腫瘤對化療藥物耐藥有關,阻斷種類載體可能影響化療藥物在細胞內的濃度.該文測定PANC-l單細胞ENTs數(shù)量,并研究阻斷細胞ENTs后對攝取5-FU的影響.PANC-1細胞膜ENTs的定性及定量研究目的:對PANC-l細胞膜ENTs定性和定量.方法:將PANC-1在含有潘生丁(100μ M)的培養(yǎng)基中溫

2、育8min-2 hr,在熒光顯微鏡下直接觀察細胞表面潘生丁發(fā)出的熒光.細胞培養(yǎng)至約2× 10<'7>后,在含有潘生丁(100μ M)的培養(yǎng)基中溫育8min、15min、l hr、2 hr,收集細胞并用乙腈裂解,熒光分光光度計測定細胞懸液中潘生丁含量,再根據(jù)平行懸液中細胞數(shù)量計算單個細胞ENTs的數(shù)量.結果:溫育8 rmin后即能觀察到細胞的熒光環(huán).潘生丁能很快與單細胞表面ENTs結合,15 min即可達高峰(20.2l× 10<'-19

3、>mol),相當于單細胞有1.25×10<'5>個ENTs,以后維持于平臺.結論:用熒光法可對細胞ENTs進行定性和定量.阻斷胰腺癌細胞ENTs對5-FU在細胞內濃聚的影響目的:研究阻斷ENTs后對PANC-l轉運5-FU能力的影響.方法:細胞培養(yǎng)至約2×10<'7>后,分為ENTs阻斷組和ENTs非阻斷組.ENTs阻斷組培養(yǎng)基中加入潘生丁(100μ M)和5-FU100pg/nl,ENTs非阻斷組培養(yǎng)基中僅加入5-FU(100pg/n

4、l).分別作用15min、30min、1 hr、2 hr、4 hr后收集細胞.用乙腈裂解細胞后,毛細管區(qū)帶電泳測定5-FU含量,根據(jù)平行懸液中細胞數(shù)量和單細胞體積計算單細胞中5-FU濃度.結果:ENTs阻斷組細胞內5-FU濃度上升緩慢,但2小時后達138.3±9.77pg/nl,隨后曲線處于高峰平臺.ENTs非阻斷組細胞內5-FU濃度在30分鐘內迅速升高并處于曲線平臺,但高峰值僅達到83.75±5.33pg/nl.明顯低于阻斷組的最高值