miR-21在胰腺癌耐受5-FU過(guò)程中的作用和機(jī)制的研究.pdf

1、背景：由于耐藥性的存在，通過(guò)化療途徑治療胰腺癌的效果受到了很大的影響。如果我們能夠估測(cè)到化療藥物在治療胰腺癌中的有效性，從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)化療耐藥作用的目的，這也成為我們研究化療治療胰腺癌的重中之重。microRNA(miRNA)已被證明廣泛參與各種腫瘤細(xì)胞的耐藥產(chǎn)生，且miRNA由于其自身的很多特點(diǎn)在疾病診治方面具有突出優(yōu)勢(shì)。但是截至目前，在研究胰腺癌化療耐藥方面，涉及 miRNA的很少。本論文從鑒定胰腺癌耐藥相關(guān) miRNA著手，在胰腺癌

2、細(xì)胞5-Fu耐藥株中，發(fā)現(xiàn)miR-21表達(dá)顯著上調(diào)，并且通過(guò)miR-21的過(guò)表達(dá)作用，在提升胰腺癌相關(guān)細(xì)胞對(duì)5-Fu的敏感度方面效果十分顯著，細(xì)胞增殖和侵襲能力也得到很大提升。在比較初步的臨床調(diào)查中，結(jié)果顯示 miR-21的表達(dá)水平和胰腺癌患者化療后的生存期是負(fù)相關(guān)的。
　　目的：研究miR-21在胰腺癌5-Fu耐藥過(guò)程中的作用及具體分子機(jī)制，以改善胰腺癌5-Fu化療耐藥的現(xiàn)狀。
　　方法：胰腺癌細(xì)胞對(duì)5-Fu的反應(yīng)性和耐受

3、性用IC50值表示。利用實(shí)時(shí)定量 PCR（real-time PCR）篩選與胰腺癌5-Fu耐藥相關(guān)的miRNA，針對(duì)這些miRNA的mature序列設(shè)計(jì)引物，以探究miR-21在耐.藥細(xì)胞株和相應(yīng)親,本細(xì)胞株間的表達(dá)差異。隨后構(gòu)建過(guò)表達(dá) miR-21的慢病毒表達(dá)載體，進(jìn)而感染目的細(xì)胞 PANC-1和PATU8988，檢測(cè)miR-21的過(guò)表達(dá)。用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)，驗(yàn)檢。測(cè)胰腺癌細(xì)胞的侵襲能力。進(jìn)一步用、invasion實(shí)驗(yàn)檢

4、測(cè)胰腺癌細(xì)胞的遷移能力。用western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)靶基因的表達(dá)變化。同時(shí)過(guò)表達(dá)靶基因和miR-21，以檢測(cè)靶基因?qū)iR-21促耐藥作用的對(duì)抗效果，驗(yàn)證miR-21促耐藥的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：與親本株P(guān)ATU8988相比，耐藥細(xì)胞株P(guān)ATU8988/5-Fu中miR-21的表達(dá)顯著上調(diào)。在胰腺癌細(xì)胞系PATU8988和PANC-1中由慢病毒介導(dǎo)miR-21的過(guò)表達(dá)，不僅導(dǎo)致兩種胰腺癌細(xì)胞系PATU8988和PANC-1對(duì)

5、化療藥物5-FU的耐受，也同時(shí)促進(jìn)了胰腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。通過(guò)更進(jìn)一步的機(jī)制探索，發(fā)現(xiàn) miR-21促進(jìn)耐藥是通過(guò)抑制靶基因PTEN和PDCD4的表達(dá)。而增強(qiáng)PTEN和PDCD4的表達(dá)可以減緩由miR-21引起的5-Fu耐藥作用，并相應(yīng)減緩胰腺癌細(xì)胞的侵襲。
　　結(jié)論：⑴miR-21促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞對(duì)5-FU的耐受性。⑵miR-21通過(guò)調(diào)控靶基因PTEN和PDCD4的表達(dá)而發(fā)揮促耐藥作用。⑶作為miR-21的靶基因，PTEN