用于鼻咽癌高效靶向診療的多肽-脂質(zhì)納米探針的研制.pdf

1、鼻咽癌是中國南方和東南亞等地域廣泛流行的高度惡性腫瘤,具有發(fā)病部位隱蔽和易于發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是鼻咽癌治療失敗的主要原因之一。目前對(duì)于局部晚期鼻咽癌主要使用以順鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療,但是有30％以上的患者由于發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致治療失敗,其5年總生存率僅為25%-30%?？笶GFR單克隆抗體Cetuximab聯(lián)合化療可以一定程度提高復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者的總生存率,但尚存在著人抗鼠抗體(HAMA)反應(yīng)導(dǎo)致的顯著毒副作用問題。與小分

2、子化療藥物相比,基于納米載體的藥物靶向運(yùn)輸具有延長藥物的體內(nèi)循環(huán)周期、提高藥物的利用率、增加藥物的細(xì)胞內(nèi)攝取能力等優(yōu)點(diǎn),并在一定程度上降低了藥物的毒副作用。因此,研制高效的鼻咽癌靶向納米藥物,對(duì)轉(zhuǎn)移性鼻咽癌的治療具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究取得如下創(chuàng)新結(jié)果:
　　(1)發(fā)明了一種八價(jià)多肽納米熒光探針,可用于靶向多肽的在體評(píng)價(jià),由此鑒定了一條鼻咽癌高特異性的靶向多肽(TTP)。具體方法是,將靶向多肽基因序列偶聯(lián)到四聚體遠(yuǎn)紅色熒光蛋

3、白(tfRFP)基因序列的碳、氮兩端,通過tfRFP成熟后的四聚化效應(yīng)自組裝形成一種八價(jià)多肽納米熒光探針Octa-FNP。在體熒光成像證實(shí),它對(duì)鼻咽癌5-8F皮下腫瘤具有高特異性的靶向能力、增強(qiáng)的富集能力和高對(duì)比度的腫瘤顯像能力,因此利用Octa-FNP可以快速靈敏地評(píng)價(jià)多肽的靶向能力。本文利用此方法鑒定出一條鼻咽癌高特異性的靶向多肽LTVSPWY(TTP),并通過對(duì)125I標(biāo)記的Octa-FNP進(jìn)行活體放射成像,同樣發(fā)現(xiàn)其能夠高效蓄積

4、于腫瘤組織內(nèi);
　　(2)發(fā)明了一種新型的同時(shí)具有鼻咽癌協(xié)同靶向增強(qiáng)能力和殺傷能力的多肽R4F-TTP。具體方法是將鑒定的TTP多肽與兩親性α螺旋多肽R4F親水端進(jìn)行偶聯(lián)。熒光顯微成像和流式細(xì)胞檢測結(jié)果均證實(shí),FITC標(biāo)記的R4F-TTP被5-8F細(xì)胞攝取的量是FITC標(biāo)記的TTP的3.1倍,是FITC標(biāo)記的R4F的10.4倍。此結(jié)果表明R4F-TTP多肽對(duì)5-8F細(xì)胞確實(shí)具有協(xié)同增強(qiáng)的靶向能力。碘化丙啶(PI)染色結(jié)果證實(shí),R4

5、F-TTP對(duì)5-8F細(xì)胞還具有選擇性殺傷能力。
　　(3)成功研制了一種對(duì)鼻咽癌5-8F腫瘤具有高選擇性靶向能力和良好治療效果的超小粒徑納米顆粒。透射電鏡和納米粒度儀結(jié)果顯示,NP-TTP是一種直徑約為11nm的球形納米顆粒。流式細(xì)胞檢測結(jié)果表明,NP-TTP被5-8F細(xì)胞攝取的量是納米顆粒NP(不含多肽TTP)的20.5倍,是NP-scrTTP(scrTTP為TTP的隨機(jī)序列多肽)的3.0倍。NP-TTP表現(xiàn)出明顯增強(qiáng)的鼻咽癌細(xì)

6、胞特異性攝取能力,提示多肽TTP被呈現(xiàn)在納米顆粒的表面。整體熒光成像結(jié)果證實(shí),近紅外熒光染料DiR-BOA標(biāo)記的NP-TTP能夠高效蓄積于鼻咽癌5-8F腫瘤內(nèi),并有效地?cái)U(kuò)散到整個(gè)腫瘤組織中,DiR-BOA的熒光信號(hào)在腫瘤組織與肝、腎等正常臟器之間具有極高的對(duì)比度。通過尾靜脈連續(xù)兩次隔天給藥,NP-TTP對(duì)5-8F腫瘤的生長抑制率為88±7%,對(duì)5-8F-mRFP轉(zhuǎn)移性腫瘤也具有明顯的抑制效果。NP-TTP對(duì)腫瘤生長的這種抑制作用,被證明

7、與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬體形成密切相關(guān)。當(dāng)NP-TTP同步裝載姜黃素后,表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制鼻咽癌5-8F-mRFP腫瘤轉(zhuǎn)移的能力,明顯延長了實(shí)驗(yàn)小鼠的生存期。
　　綜上所述,本文基于四聚體熒光蛋白發(fā)明了一種八價(jià)多肽納米熒光探針,鑒定了一條鼻咽癌高特異性的靶向多肽TTP。將TTP與兩親性α螺旋多肽R4F偶聯(lián)所形成的雜交多肽R4F-TTP,不僅具有協(xié)同增強(qiáng)鼻咽癌靶向攝取和選擇性殺傷的能力,還能控制脂質(zhì)納米顆粒形成及其功能。利用R4F-TT