硫酸魚精蛋白介導(dǎo)的鼠膀胱粘膜上皮損傷模型的建立及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　 1.通過膀胱內(nèi)灌注硫酸魚精蛋白建立膀胱上皮急性和慢性損傷動(dòng)物模型。
　　 2.研究損傷后膀胱上皮細(xì)胞,GAGs層,粘膜通透性和肥大細(xì)胞的改變及其相互關(guān)系,為膀胱炎性疾病,特別是IC的研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 材料與方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象
　　 成年雌性SD大鼠,鼠齡6-8周,體重228～267g。
　　 2.主要試劑
　　 硫酸魚精蛋白粉劑(Protamine su

2、lfate Grade X):SIGMA公司；山羊抗大鼠S-GAG ELISA試劑盒,山羊抗大鼠HA ELISA試劑盒:ADL公司；高碘酸-無色品紅染色試劑盒:廣州市儷科貿(mào)有限公司；2x106 cmp/ml碳14標(biāo)記尿素溶液:由天津放射學(xué)研究所提供。
　　 3.方法
　　 膀胱損傷模型的建立,通過膀胱內(nèi)灌注50mg/ml PS0.4ml,膀胱內(nèi)保留30分鐘建立SD大鼠短期損傷模型:通過膀胱內(nèi)灌注50mg/ml PS0.4

3、ml,膀胱內(nèi)保留30分鐘,60分鐘后重復(fù)一次,處理后間隔兩天并以此作為一次處理周期,共進(jìn)行20個(gè)周期處理以建立SD大鼠長(zhǎng)期損傷模型。模型建立后分別對(duì)短期、長(zhǎng)期損傷模型行HE染色,甲苯胺藍(lán)染色,透射電鏡檢查。對(duì)短期損傷模型行尿液GAGs ELISA測(cè)定,高碘酸.希夫染色(PAS)和粘膜通透性測(cè)定。
　　 4.統(tǒng)計(jì)與分析
　　 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,兩組獨(dú)立樣本采用Student’t檢驗(yàn),同組內(nèi)

4、不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析,以P<0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果:
　　 1.通過50mg/ml硫酸魚精蛋白單次灌注膀胱建立SD大鼠膀胱急性損傷模型。模型中膀胱表面上皮細(xì)胞脫落；傘狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)和上皮細(xì)胞間緊密連接復(fù)合體被破壞；表層上皮細(xì)胞游離表面微絨毛形成；粘膜下層、肌層間出現(xiàn)多形性中性粒細(xì)胞等急性炎癥細(xì)胞侵潤(rùn),偶見肥大細(xì)胞侵潤(rùn),與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=0.041(P>0.05)；組織水腫、血管充

5、血明顯。損傷7天后膀胱壁形態(tài)改變基本恢復(fù)正常。
　　 2.通過50mg/ml硫酸魚精蛋白反復(fù)膀胱灌注,持續(xù)60天,建立SD大鼠膀胱慢性損傷模型。慢性損傷模型在膀胱急性損傷的基礎(chǔ)上,出現(xiàn)膀胱壁增厚；膀胱組織間出現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞,肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=7.344(P<0.05)。電鏡下移行細(xì)胞游離腔面結(jié)構(gòu)低平,失去扇貝樣外觀,細(xì)胞間隙增寬十分明顯,肥大細(xì)胞以脫顆粒或部分脫顆粒為主；并且上述改變持續(xù)存

6、在。膀胱表現(xiàn)出損傷,修復(fù),增殖并存的狀態(tài)。
　　 3.PAS染色表明SD大鼠膀胱上皮細(xì)胞表面存在著一層連續(xù)均一的PAS+GAGs層。PS單次處理1天后上皮細(xì)胞表面PAS+層消失,處理3天后GAGs層斷續(xù)存在,處理7天后膀胱粘膜層GAGs恢復(fù)連續(xù)均一的形態(tài)。單次PS處理使尿中S-GAGs水平在損傷后第1天,t=2.174(P<0.05)；第7天增高,t=3.517(P<0.01)。HA在損傷后第1天在尿中升高,t=2.872(P<

7、0.05)。損傷后上皮細(xì)胞啟動(dòng)修復(fù)機(jī)制,上皮層內(nèi)中間細(xì)胞成熟為傘狀細(xì)胞同時(shí)伴有GAGs合成的增加。
　　 4.單次PS處理后第1天,伴隨GAGs層的破壞,膀胱粘膜層對(duì)尿素通透性增加,與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=2.915(P<0.05)。處理后第7天膀胱粘膜對(duì)尿素的通透性在損傷組和對(duì)照組中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=0.550(P>0.05),膀胱上皮細(xì)胞恢復(fù)對(duì)尿中小分子溶質(zhì)的不通透性。
　　 結(jié)論:
　　 1

8、、尿液中溶質(zhì)對(duì)膀胱組織具有毒性。傘狀細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)和上皮細(xì)胞間緊密連接的完整性是維持尿液對(duì)膀胱不通透性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。膀胱尿路上皮細(xì)胞的損傷,為整個(gè)損傷的核心環(huán)節(jié),隨后的膀胱炎癥和肥大細(xì)胞活化都是上皮細(xì)胞損傷的繼發(fā)過程。
　　 2、膀胱上皮細(xì)胞表面S-GAG及其結(jié)合的水分子層是其下膀胱表面?zhèn)銧罴?xì)胞和細(xì)胞間緊密連接的重要保護(hù)機(jī)制,其可以將尿中小分子毒性溶質(zhì)如尿素排斥在膀胱表面以外。S-GAG被PS中和,直接導(dǎo)致水分子層受損是上皮細(xì)