燒傷膿毒癥后內(nèi)皮細(xì)胞微粒的釋放及其損傷作用的研究.pdf

1、目的：1.研究燒傷和燒傷膿毒癥循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞微粒和血小板微粒的變化規(guī)律，體外研究?jī)?nèi)毒素(LPS)刺激對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞釋放內(nèi)皮細(xì)胞微粒的影響。2.研究燒傷膿毒癥或LPS誘導(dǎo)釋放的內(nèi)皮細(xì)胞微粒對(duì)正常細(xì)胞組織的影響。3.分析內(nèi)皮細(xì)胞微粒對(duì)正常細(xì)胞組織損傷作用機(jī)制。4.研究鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛治療對(duì)細(xì)胞微粒損傷特性的影響。
　　 方法：1.采用流式細(xì)胞儀方法觀察正常成年人、燒傷休克期患者、燒傷感染患者血漿EMPs和PMPs的變化，觀察LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放

2、EMPs的變化。
　　 2.提取燒傷、內(nèi)毒素血癥、燒傷內(nèi)毒素血癥和正常大鼠NIPs，分別注入燒傷MPs組、內(nèi)毒素MPs組、燒傷內(nèi)毒素MPs組和正常MPs組大鼠體內(nèi)，并另設(shè)未注射NiPs的正常對(duì)照大鼠。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法研究MPs對(duì)大鼠血漿炎癥介質(zhì)和凝血指標(biāo)的影響。采用伊文氏蘭法和肺組織濕/干重比法對(duì)大鼠肺水腫程度的影響，觀察大鼠肺組織切片的病理變化，采用Western blot方法檢測(cè)肺組織Ⅶ.Cadhcrin蛋白的表

3、達(dá)。提取LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放的EMPs，在體外研究EMPs對(duì)正常內(nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和通透性的影響。
　　 3.提取LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放的EMPs，通過iTRAQ蛋白質(zhì)組檢測(cè)和激光共聚焦顯微鏡等方法對(duì)EMPs蛋白分子水平的研究，分析EMPs的損傷作用機(jī)制。
　　 4.提取注射和未注射咪達(dá)唑侖和芬太尼的燒傷內(nèi)毒素血癥大鼠MPs，觀察兩者對(duì)正常大鼠炎癥介質(zhì)、凝血指標(biāo)的表達(dá)，單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)，肺水腫和肺組織蛋白表

4、達(dá)的差異。
　　 結(jié)果：1.燒傷休克患者和燒傷感染患者血漿EMPs和PMPs水平較正常人明顯升高。燒傷休克患者CD3I+EMPs，CD144+EMPs和CD54+EMPs占血漿總體微粒的比值升高，液體復(fù)蘇治療后CD31+EMPs比值下降。燒傷感染患者CD54+EMPs比值升高，其中膿毒癥患者CD31+EMPs和CD54+EMPs比值高于非膿毒癥患者。濃度為10-20ug/ml的LPS體外刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放的EMPs水平增高，CD3

5、1+EMPs比值加大。
　　 2.燒傷內(nèi)毒素MPs組大鼠血漿IL.113、TNF.Q、HMGB1、TF和D-Dimer水平升高，肺微血管通透性增加，肺組織鈣粘蛋白表達(dá)降低。濃度為10ug/ml的LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的EMPs，在體外能抑制正常內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并增加單層內(nèi)皮細(xì)胞膜的通透性，對(duì)細(xì)胞的遷移無明顯影響。
　　 3.蛋白組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)出LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放的EMPs與無LPS誘導(dǎo)釋放的EMPs有50種

6、差異蛋白，其中22種蛋白表達(dá)升高，26種蛋白表達(dá)降低，2個(gè)蛋白僅存在于一個(gè)樣本中 LPS誘導(dǎo)釋放EMPs或MPs表達(dá)TLR4、IL.6、F-selectin等蛋白表達(dá)升高。
　　 4.正常大鼠注射燒傷或血毒素血癥大鼠的MPs后，血漿IL-lfl、TNF一Q、HMGB1、TF和D-Dime顯著升高，而予以鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛處理的燒傷或內(nèi)毒素血癥大鼠MPs后，上述指標(biāo)升高幅度有所降低，并且能提高肺組織Ve-Cadherin表達(dá)量，降低單核細(xì)胞