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1、目的:觀察廣西桂郁金(GGYJ)含藥血清對(duì)大鼠HSC-T6細(xì)胞增殖、HSC-T6細(xì)胞自身轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的分泌、以及對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1Ⅰ型受體(Tβ-RⅠ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1Ⅱ型受體(Tβ-RⅡ)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMPs-13)、al(Ⅰ)膠原(aI-collagen) mRNA表達(dá)的影響,探討GGYJ抗肝纖維化作用的分子機(jī)制。
方法:選擇大鼠HSC-T6細(xì)胞
2、株,分為高、中、低三個(gè)給藥組(相當(dāng)于成人每日用量的20倍、10倍、5倍),以及空白組和陰性組共5組,均取用5%、10%、20%三種濃度的含藥血清,同時(shí)作用HSC-T6細(xì)胞24h、48h、72h后,以四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)GGYJ含藥血清對(duì)HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制作用;用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè) GGYJ含藥血清對(duì)HSC-T6細(xì)胞自身分泌TGF-β1表達(dá)的影響;以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)分析GGYJ
3、含藥血清作用HSC-T6細(xì)胞后,其Tβ-RⅠ、Tβ-RⅡ、TIMP-1、MMPs-13、aI-collagen mRNA表達(dá)的變化。
結(jié)果:⑴ MTT檢測(cè)結(jié)果:結(jié)果顯示,正常大鼠血清能明顯加速HSC-T6細(xì)胞的增殖,其抑制率隨含藥血清濃度的增加而降低,但無顯著性差異。抑制率與含藥血清作用時(shí)間不完全呈正相關(guān)性,其最好的作用濃度為10%,作用時(shí)間為48h。
?、艵LISA檢測(cè)結(jié)果:各含藥血清組與正常大鼠血清組(空白血清組)
4、比較,對(duì)TGF-β1無明顯抑制作用;正常大鼠血清組與未加大鼠血清組(陰性組)比較,TGF-β1含量有顯著的增加(P<0.01)。
?、荝T-PCR檢測(cè)結(jié)果:各目的基因的空白組相對(duì)表達(dá)量(目的基因光密度與β-actin的比值)與陰性組的比較,均有顯著增加;其中 Tβ-RⅠ各給藥組的相對(duì)表達(dá)量與空白組比較有抑制作用(P<0.01),但各處理組之間無顯著性差異;Tβ-RⅡ給藥組與空白組比較無明顯抑制作用,各處理組之間無顯著性差異;TI
5、MP-1給藥組與空白組比較有抑制作用(P<0.01),各處理組之間有顯著差異(P<0.01);MMPs-13給藥組與空白組比較有增加作用(P<0.05),各處理組之間無顯著性差異;aI-collagen給藥組與空白組比較有抑制作用(P<0.01),各處理組之間有顯著差異(P<0.01)。
結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)中,GGYJ含藥血清對(duì)HSC-T6細(xì)胞株的增殖有抑制作用;對(duì) HSC-T6細(xì)胞自身分泌的TGF-β1無明顯抑制作用;對(duì) Tβ-
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