鼠源白細(xì)胞介素4和雪花蓮?fù)庠茨鼗虻脑吮磉_及其免疫功能的研究.pdf

1、本研究采用了基因克隆表達及蛋白純化，Western-blot等分子生物學(xué)手段，希望通過該研究推進口服或飼喂疫苗來更有效并且方便的預(yù)防治療病毒性腫瘤疾病。 首先，我設(shè)計一對引物，通過克隆擴增得到了鼠源白細(xì)胞介素4基因。將這段基因段克隆到pGEM-Teasy載體，經(jīng)測序確定序列正確后，我分別將這段基因克隆到pGEX-KG和pET28a表達載體。在IPTG的誘導(dǎo)下，這兩段基因分別在大腸桿菌DH5α和BL21中都得到了高效表達。表達產(chǎn)物

2、的大小分別為42kDa、18.6kDa。純化mIL4-GST融合蛋白免疫蛋雞和兔子制備卵黃抗體和兔血清抗體。該抗體可與原核表達的mIL4-GST和mIL4-his融合蛋白發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。該抗體的獲得為深入研究mIL4蛋白的功能提供了基礎(chǔ)。 通過相同的分子生物學(xué)克隆表達技術(shù)成功的表達了鼠源白細(xì)胞介素4與雪花蓮凝集素的融合蛋白(pET28a-mIL4GNA)，融合蛋白大小約為27kDa。純化該融合蛋白，然后該融合蛋白飼喂balb

3、/c小鼠，每只一周飼喂一次，每次用量約400ug，共灌喂四次。最后取血，用Dot-blot檢測血清中含有鼠源白細(xì)胞介素4。但是我們檢測到鼠源白細(xì)胞介素4的抗體。同時解剖BALB/c小鼠檢查，并沒有有任何病理變化。 綜上所述，初步鑒定雪花蓮?fù)庠茨鼐哂袛y帶外源蛋白進入血液循環(huán)的功能。以后我們將通過其它手段表達有蛋白活性的融合蛋白(pET28a-mIL4GNA)，通過其它實驗方法進一步驗證雪花蓮?fù)庠茨氐墓δ?，深入探討雪花蓮?fù)庠?/p>