鼠源白細(xì)胞介素4和雪花蓮?fù)庠茨鼗虻脑吮磉_(dá)及其免疫功能的研究.pdf

1、本研究采用了基因克隆表達(dá)及蛋白純化，Western-blot等分子生物學(xué)手段，希望通過(guò)該研究推進(jìn)口服或飼喂疫苗來(lái)更有效并且方便的預(yù)防治療病毒性腫瘤疾病。 首先，我設(shè)計(jì)一對(duì)引物，通過(guò)克隆擴(kuò)增得到了鼠源白細(xì)胞介素4基因。將這段基因段克隆到pGEM-Teasy載體，經(jīng)測(cè)序確定序列正確后，我分別將這段基因克隆到pGEX-KG和pET28a表達(dá)載體。在IPTG的誘導(dǎo)下，這兩段基因分別在大腸桿菌DH5α和BL21中都得到了高效表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物

2、的大小分別為42kDa、18.6kDa。純化mIL4-GST融合蛋白免疫蛋雞和兔子制備卵黃抗體和兔血清抗體。該抗體可與原核表達(dá)的mIL4-GST和mIL4-his融合蛋白發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。該抗體的獲得為深入研究mIL4蛋白的功能提供了基礎(chǔ)。 通過(guò)相同的分子生物學(xué)克隆表達(dá)技術(shù)成功的表達(dá)了鼠源白細(xì)胞介素4與雪花蓮凝集素的融合蛋白(pET28a-mIL4GNA)，融合蛋白大小約為27kDa。純化該融合蛋白，然后該融合蛋白飼喂balb

3、/c小鼠，每只一周飼喂一次，每次用量約400ug，共灌喂四次。最后取血，用Dot-blot檢測(cè)血清中含有鼠源白細(xì)胞介素4。但是我們檢測(cè)到鼠源白細(xì)胞介素4的抗體。同時(shí)解剖BALB/c小鼠檢查，并沒(méi)有有任何病理變化。 綜上所述，初步鑒定雪花蓮?fù)庠茨鼐哂袛y帶外源蛋白進(jìn)入血液循環(huán)的功能。以后我們將通過(guò)其它手段表達(dá)有蛋白活性的融合蛋白(pET28a-mIL4GNA)，通過(guò)其它實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)一步驗(yàn)證雪花蓮?fù)庠茨氐墓δ?，深入探討雪花蓮?fù)庠?/p>