減體肝移植后受體來源骨髓干細胞跨分化的實驗研究.pdf

1、目的:肝組織再生是肝臟對損傷修復(fù)反應(yīng)的基本特征，為肝臟對損傷或?qū)δ苷{(diào)節(jié)的精細協(xié)調(diào)性增生反應(yīng)。由于肝臟強大的再生能力，小體積減體肝移植才得以成功開展以彌補移植領(lǐng)域供體器官來源的不足。在肝臟組織缺損后，除成熟肝細胞能大量增生以外，已經(jīng)證明某些前體細胞或干細胞能衍化成肝細胞，這些細胞主要來自肝內(nèi)卵圓細胞和來自肝外的骨髓造血干細胞。已有一些動物實驗研究闡述了造血干細胞在機體非造血組織損傷修復(fù)細胞分化中的作用，但關(guān)于減體肝移植后造血干細胞在肝組

2、織中的分化，目前還未闡明。本實驗旨在研究大鼠減體肝移植后受體來源的造血干細胞在肝組織中跨分化的可能性以及部分相關(guān)影響因素，為促進減體肝移植后肝細胞再生提供新的思路應(yīng)用前景。 方法: 1.首先采用LEwIs大鼠同基因原位肝移植模型觀察30％部分肝移植后肝臟增生的動態(tài)過程，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對肝臟細胞增生的時相性進行觀察。采用性別交叉雌性到雄性大鼠肝移植模型進行30％，60％及100％不同大小移植物同基因原位肝移植。應(yīng)用N

3、ASDCL特殊染色檢測肝臟中前體細胞的數(shù)量，觀察受體來源骨髓干細胞在肝臟中的募集，同時利用免疫熒光原位雜交技術(shù)檢查移植肝臟中受體來源Y-染色體陽性的肝細胞數(shù)量，觀察不同大小移植物、缺血損傷及G-CSF對部分肝移植后受體來源骨髓干細胞在肝臟中跨分化的影響。 2．部分肝移植后造血干細胞在肝臟內(nèi)跨分化 用雌性到雄性性別交叉肝臟原位移植大鼠模型研究造血干細胞(HSOs)在減體移植肝中的跨分化，用免疫熒光定位顯示受體來源ttSCs在肝臟

4、跨分化成肝細胞的比率。前一實驗顯示肝細胞增生主要過程持續(xù)一周左右，因此我們選擇移植手術(shù)后的7天作為實驗觀察終點，全肝移植Y一染色體陽性肝細胞率為0.66％，為低頻率增生，而60％和30％減體肝移植Y一染色體陽性肝細胞率增加到1.89％和3.78％(各組間比較，p

5、87組比較。 3．粒細胞集落刺激因子(G-CSF)對受體來源跨分化為肝細胞的影響用NASDCL染色顯示肝臟內(nèi)前體細胞，觀察G-CSF對HSCs肝內(nèi)募集的影響，當G-CSF應(yīng)用于全肝移植時，與非治療組(7.8±1.9／10LPF)相比，G-CSF能使移植肝內(nèi)前體細胞數(shù)增加到59.5±13.3％／10LPF。將G-cSF運用于30％減體肝移植時，與非治療組(21.O±5.1／10LPF)比較，G-CSF能使移植肝內(nèi)前體細胞明顯增加到

6、99.2±7.2／10L,PF(p<0.01)。而且，將部分肝移植與全肝移植比較，無論是否運用G-CSF，30％減體肝移植均能在一定程度上增加HSCs在肝內(nèi)的募集。說明GcSF和部分肝移植對HsCs在肝內(nèi)的募集可能存在協(xié)同作用。另外，G-CSF能明顯提高30％減體肝移植肝臟內(nèi)Y-染色體陽性肝細胞率。然而，全肝移植組，G-CSF對受體來源HSCs在肝臟內(nèi)跨分化的Y-染色體陽性肝細胞率卻沒有影響。 結(jié)論: 1．在大鼠全肝移植