版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、背景與目的:
硒是人和動(dòng)物生命活動(dòng)所必需的微量元素。硒缺乏會(huì)引起含硒酶活性降低,氧自由基清除受阻、內(nèi)分泌紊亂等一系列機(jī)體功能障礙,其對神經(jīng)系統(tǒng)的影響也越來越引起學(xué)者們的重視。
前期本課題組建立了人工膳食低硒、低碘和聯(lián)合低硒低碘喂養(yǎng)的SD大鼠動(dòng)物模型,并歷時(shí)近三年繁衍至仔四代,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),仔三代、四代低硒大鼠已經(jīng)表現(xiàn)出不同程度體格和神經(jīng)發(fā)育延遲、腦內(nèi)EGFR/MAPK信號傳導(dǎo)通路有一定影響、但Morris水迷宮空間記
2、憶能力沒有明顯影響等。
本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上,再次通過人工低硒飼料喂養(yǎng) F344近交系大鼠復(fù)制低硒動(dòng)物模型,深入細(xì)致研究其子代出生后早期不同時(shí)間點(diǎn)4d,7d,14d,21d的含硒酶 GPx(glutathione peroxidase,谷胱甘肽過氧化物酶)活性變化、早期神經(jīng)行為發(fā)育、子代發(fā)育期大鼠開場行為和Morris水迷宮空間記憶能力表現(xiàn)。并通過檢測腦神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)發(fā)育、海馬神經(jīng)前體細(xì)胞標(biāo)記蛋白(nestin)、增殖細(xì)胞核
3、抗原(PCNA)、膠質(zhì)細(xì)胞分化成熟蛋白――膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)和2’,3’-環(huán)核甘酸3’-磷酸二酯酶(2,3- cyclic nucleotide,3-phosphodiesterase, CNPase)的表達(dá)情況,從發(fā)育,行為,功能到海馬局部形態(tài)結(jié)構(gòu)和分化、成熟蛋白的表達(dá),進(jìn)一步深入探討低硒對早期神經(jīng)發(fā)育的影響,尋找這一影響的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能基礎(chǔ)。
方法
4、:
1.復(fù)制F344低硒大鼠動(dòng)物模型參照本課題組已成功建立的人工膳食SD低硒大鼠模型的飼料配方,以F344純系大鼠為實(shí)驗(yàn)對象建立低硒動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)分為兩組,分別喂以不同硒碘水平的人工配制飼料:(1)合成飼料對照組(Control),硒含量0.1~0.3μg/g,碘含量≥0.2μg/g;(2)低硒組(Se-),硒含量0.02μg/g,碘含量≥0.2μg/g。
2. GPx活性測定改良DTNB法檢測母代和子一代P4、P7
5、、P14和P21大鼠全血中GPx活性;
3.檢測子一代大鼠出生后生長體重變化、生理發(fā)育指標(biāo)、早期神經(jīng)行為學(xué)改變和開場行為表現(xiàn)。
4.Morris水迷宮空間學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)觀察子一代大鼠尋找站臺的潛伏期、搜索策略,穿越原站臺次數(shù)、在原站臺象限停留時(shí)間等。
5.Nissl(甲苯胺藍(lán))染色觀察子一代大鼠P4、P7、P14和P21海馬形態(tài)學(xué)變化。
6.免疫組化技術(shù)觀察生后仔鼠不同時(shí)間點(diǎn)(P4、P7、P14和P
6、21)海馬內(nèi)神經(jīng)前體細(xì)胞標(biāo)記蛋白nestin、增殖細(xì)胞核抗原PCNA、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化成熟相關(guān)蛋白GFAP、CNPase的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1. GPx活性:(1)母代Se-組大鼠全血GPx活性顯著低于對照組(P<0.05);(2)子一代Se-組同日齡大鼠GPx活性也顯著低于相應(yīng)對照組(P<0.05)。
2.早期生長發(fā)育指標(biāo)的檢測:Se-組仔鼠出生后早期體重增長較對照組緩慢(P<0.05),但耳廓分離、出
7、毛、門齒萌出、睜眼及毛發(fā)發(fā)育等幾個(gè)指標(biāo)與對照組比較無顯著差異。
3.早期神經(jīng)行為發(fā)育指標(biāo)檢測中:生后4天時(shí),Se-組仔鼠的平面翻正評分明顯較對照組低(P<0.05)、懸崖回避實(shí)驗(yàn)陽性率也顯著低于對照組;7天時(shí),兩組間無顯著性差異。P10時(shí),Se-組仔鼠的聽覺驚愕陽性達(dá)標(biāo)率低于對照組(P<0.05);在P12和P14時(shí)的前臂握力和行走能力實(shí)驗(yàn)中,Se-組與對照組表現(xiàn)無顯著性差異(P﹥0.05)。開場實(shí)驗(yàn)中,Se-組雄鼠在中央格停
8、留時(shí)間、穿行格數(shù)(活動(dòng)能力)較對照組明顯減少,(P﹤0.05);Se-組雌鼠在開場實(shí)驗(yàn)各個(gè)指標(biāo)與對照組無顯著性差異。
4. Morris水迷宮空間學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn):(1)潛伏期:定向航行實(shí)驗(yàn)第4、5天時(shí),Se-組潛伏期明顯長于對照組(P<0.01);兩組雌雄性別之間無顯著性差異;(2)運(yùn)動(dòng)策略結(jié)果:定向航行實(shí)驗(yàn)第5~9時(shí)段采用直線式和趨向式為主要的尋找策略,Se-組在第6和第9時(shí)段的訓(xùn)練中所采取的直線式策略次數(shù)明顯比對照組少(P=
9、0.009; P=0.03)。(3)空間探索實(shí)驗(yàn)中,Se-組在原站臺所在象限停留時(shí)間比對照組短(P<0.05)。
5.海馬形態(tài)學(xué)觀察:從P4~P21,海馬各分區(qū)錐體細(xì)胞層逐漸變薄,而齒狀回(DG)顆粒細(xì)胞層細(xì)胞則呈逐漸增多的趨勢。相同日齡內(nèi),與對照組相比,Se-組海馬皮層錐體細(xì)胞層較厚,齒狀回(dentate gyrus, DG)內(nèi)臂形成較晚。
6.海馬神經(jīng)前體細(xì)胞標(biāo)記蛋白巢蛋白(nestin)和增殖細(xì)胞核抗原(PC
10、NA)免疫組化結(jié)果:總體上,從P4~P21這個(gè)發(fā)育過程中,大鼠海馬中都有nestin和PCNA抗原的表達(dá),且兩個(gè)指標(biāo)陽性總體表達(dá)趨勢比較相似,都隨日齡增加逐漸降低。陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和積分光密度值測量結(jié)果:(1)P4時(shí) Se-組海馬 DG區(qū)的nestin表達(dá)較對照組多(P<0.05),其余時(shí)間點(diǎn)在相同海馬分區(qū),兩組間陽性表達(dá)無顯著差異。(2)PCNA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果:與對照組相比,Se-組P4~P7海馬CA1和CA3區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)多;P21時(shí)C
11、A1和DG區(qū)陽性細(xì)胞也較對照組多((P<0.05)。
7.海馬膠質(zhì)細(xì)胞分化成熟相關(guān)蛋白免疫組化結(jié)果:(1)GFAP:P4海馬未見陽性細(xì)胞表達(dá), P7時(shí)低硒組海馬 DG區(qū), P21時(shí)的DG區(qū) GFAP免疫組化積分光密度值較對照組小(P<0.05),在選取的其余發(fā)育時(shí)間點(diǎn)無顯著差異(P>0.05)。(2)CNPase:從P4~P7,海馬均未見CNPase陽性表達(dá);至P14時(shí),僅能在海馬傘、海馬槽和分子細(xì)胞層見到少量呈絲狀的弱陽性表
12、達(dá), P21海馬低硒組和對照組海馬各區(qū)CNPase的陽性表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1.成功復(fù)制F344近交系大鼠低硒動(dòng)物模型并繁殖到子一代
2.低硒可導(dǎo)致子一代大鼠在早期生長,神經(jīng)生理反射及神經(jīng)行為方面出現(xiàn)不同程度的發(fā)育延遲,影響雄鼠開場實(shí)驗(yàn)中對新異環(huán)境的適應(yīng)能力。
3.低硒可導(dǎo)致子一代大鼠在Morris水迷宮的空間記憶能力減弱。
4.低硒能不同程度地延遲大鼠海馬形態(tài)發(fā)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 長期低硒低碘對仔4代大鼠神經(jīng)行為發(fā)育和膠質(zhì)細(xì)胞分化成熟蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 雙酚A對F344大鼠甲狀腺組織雌激素受體α表達(dá)的影響.pdf
- 丙戊酸鈉對人海馬神經(jīng)前體細(xì)胞分化和凋亡的影響及作用機(jī)制.pdf
- 仔三代低硒大鼠海馬形態(tài)發(fā)育及分化成熟相關(guān)蛋白和BDNF表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 小鼠體細(xì)胞向多能性神經(jīng)前體細(xì)胞和成熟多巴胺能神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化.pdf
- 雌鼠高齡生育子代海馬Skp2和神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá).pdf
- 維甲酸對新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞-前體細(xì)胞體外分化的影響.pdf
- 低濃度毒死蜱對神經(jīng)前體細(xì)胞和端腦發(fā)育的影響.pdf
- 缺氧對新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響.pdf
- C57BL-6J-EGFP小鼠和F344大鼠胎肝干-祖細(xì)胞分離純化及定向分化潛能的研究.pdf
- 成年大鼠海馬神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)功能性的L-型鈣通道.pdf
- 硫酸軟骨素蛋白多糖在神經(jīng)前體細(xì)胞及其分化細(xì)胞中的表達(dá)和調(diào)控.pdf
- DEHP胚胎期暴露對大鼠子代神經(jīng)行為發(fā)育的影響及機(jī)制研究.pdf
- 骨髓基質(zhì)細(xì)胞對神經(jīng)前體細(xì)胞分化的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 初步研究Sifn-α對F344大鼠原位膀胱癌局部灌注的療效及對全身免疫反應(yīng)的影響.pdf
- 低濃度地亞農(nóng)對胚胎神經(jīng)前體細(xì)胞增殖分化平衡的影響.pdf
- 亞砷酸鈉對F1代大鼠海馬組織神經(jīng)生長因子、神經(jīng)生長相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf
- 絞股藍(lán)皂苷對酒精損傷神經(jīng)前體細(xì)胞的保護(hù)作用及其對神經(jīng)前體細(xì)胞增殖能力影響的研究.pdf
- 大鼠外周神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)前體細(xì)胞的觀察.pdf
- GPR50促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化的研究.pdf
評論
0/150
提交評論