小鼠胸腺增齡相關(guān)新分子IH1的功能研究——參與NF-κB細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo).pdf

1、胸腺增齡性退化與萎縮是機(jī)體老化過(guò)程中最重要的免疫系統(tǒng)表現(xiàn)之一，是決定和制約免疫系統(tǒng)老化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。然而，有關(guān)胸腺萎縮的調(diào)控機(jī)制尚未完全明了。近年研究表明，胸腺萎縮過(guò)程伴隨著基因表達(dá)的改變，基因表型不同的個(gè)體其胸腺萎縮的速度和程度存在明顯的差異。因此，胸腺萎縮是一個(gè)受遺傳基因調(diào)控的過(guò)程。本課題組在前期研究中，利用差異顯示技術(shù)，獲得了4條在老齡鼠和幼齡鼠差異表達(dá)的基因，并初步探索了其中一條基因IH1的作用分子。經(jīng)酵母雙雜交、免疫共沉淀和PU

2、LL-DOWN等實(shí)驗(yàn)，結(jié)果提示，IH1分子可能是個(gè)信號(hào)分子，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。經(jīng)NF-κB介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是最重要的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，它在細(xì)胞增殖和凋亡、免疫應(yīng)答、腫瘤發(fā)生、心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中均起著重要作用。本研究旨在探索IH1與NF-κB細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)系，并開展了下述工作： 一是構(gòu)建了IH1原核表達(dá)載體，表達(dá)并純化了IH1蛋白，制備了抗IH1單克隆抗體；二是構(gòu)建了IH1真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染了EL4細(xì)胞，使之過(guò)表達(dá)IH

3、1分子；三是設(shè)計(jì)合成了IH1siRNA，并對(duì)EL4細(xì)胞進(jìn)行了RNA干擾實(shí)驗(yàn)。本研究發(fā)現(xiàn)，IH1過(guò)表達(dá)能顯著提高IL-1β刺激所引起的NF-κB活化，而IH1基因表達(dá)的沉默則顯著降低IL-1β刺激所引起的NF-κB活化。同時(shí)，我們用激光共聚焦顯微技術(shù)對(duì)細(xì)胞內(nèi)IH1分子的分布和IH1與RACK1、UbB及NEDD8分子的共定位進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)IH1分子主要分布于胞漿中，能與RACK1、UbB及NEDD8分子共同定位。 綜上，我們認(rèn)為I