磷脂酰肌醇-3激酶信號轉(zhuǎn)導通路對缺氧誘導的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞增生和VEGF表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文研究目的：觀察磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol-3Kinase，PI3K)信號轉(zhuǎn)導通路對缺氧誘導的RPE細胞增生和VEGF表達的影響。 研究方法：在含有200μMCoCl2的培養(yǎng)液內(nèi)分別培養(yǎng)人RPE細胞0、1、4、8、12和24h，建立人RPE細胞胞內(nèi)化學缺氧模型。RT-PCR、Westernblot和細胞免疫熒光染色法檢測缺氧不同時間PI3K的表達；30μmol/LLY294002加入人RPE細

2、胞培養(yǎng)液，在缺氧狀態(tài)下分別培養(yǎng)1、8、12和24h，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbantassay,ELISA)檢測PI3K信號通路阻斷前后缺氧組培養(yǎng)RPE細胞上清液中VEGF的含量；同時用流式細胞儀(flowcytometry，F(xiàn)CM)檢測PI3K信號通路阻斷前后缺氧RPE細胞的增生指數(shù)。 研究結(jié)果：CoCl2所致缺氧前后培養(yǎng)的人RPE細胞均有PI3KmRNA和蛋白的表達，在實驗觀察期內(nèi)，隨缺

3、氧時間延長，PI3KmRNA和蛋白表達水平逐漸增高；細胞免疫熒光法檢測顯示，缺氧刺激1、4、8、12和24h，RPE細胞膜上PI3K磷酸化水平逐漸增高(P＜0.05)；ELISA檢測證實，隨缺氧時間延長，RPE細胞上清液中VEGF含量逐漸增加(P＜0.05)，而LY294002處理組RPE細胞VEGF含量顯著低于對照組(P＜0.05)；FCM檢測顯示，RPE細胞增生活性隨缺時間延長逐漸增高，LY294002處理組RPE細胞增生活性明顯低

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