磷脂酰肌醇-3激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)缺氧誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生和VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、本文研究目的：觀察磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol-3Kinase，PI3K)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)缺氧誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞增生和VEGF表達(dá)的影響。 研究方法：在含有200μMCoCl2的培養(yǎng)液內(nèi)分別培養(yǎng)人RPE細(xì)胞0、1、4、8、12和24h，建立人RPE細(xì)胞胞內(nèi)化學(xué)缺氧模型。RT-PCR、Westernblot和細(xì)胞免疫熒光染色法檢測(cè)缺氧不同時(shí)間PI3K的表達(dá)；30μmol/LLY294002加入人RPE細(xì)

2、胞培養(yǎng)液，在缺氧狀態(tài)下分別培養(yǎng)1、8、12和24h，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbantassay,ELISA)檢測(cè)PI3K信號(hào)通路阻斷前后缺氧組培養(yǎng)RPE細(xì)胞上清液中VEGF的含量；同時(shí)用流式細(xì)胞儀(flowcytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)PI3K信號(hào)通路阻斷前后缺氧RPE細(xì)胞的增生指數(shù)。 研究結(jié)果：CoCl2所致缺氧前后培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞均有PI3KmRNA和蛋白的表達(dá)，在實(shí)驗(yàn)觀察期內(nèi)，隨缺

3、氧時(shí)間延長(zhǎng)，PI3KmRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸增高；細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)顯示，缺氧刺激1、4、8、12和24h，RPE細(xì)胞膜上PI3K磷酸化水平逐漸增高(P＜0.05)；ELISA檢測(cè)證實(shí)，隨缺氧時(shí)間延長(zhǎng)，RPE細(xì)胞上清液中VEGF含量逐漸增加(P＜0.05)，而LY294002處理組RPE細(xì)胞VEGF含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)；FCM檢測(cè)顯示，RPE細(xì)胞增生活性隨缺時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高，LY294002處理組RPE細(xì)胞增生活性明顯低