TGF-β1介導HMGA2調節(jié)CDK6對膀胱癌細胞周期的影響.pdf

1、第一部分 HMGA2與CDK6在膀胱癌組織標本中的表達關系
　　目的：
　　在膀胱癌組織標本中分析HMGA2與CDK6表達之間的相關性。方法：
　　利用免疫組化方法分析99例膀胱癌組織中HMGA2與CDK6的表達關系。將99例膀胱癌組織標本按照其病理結果分為低級別組和高級別組，依據免疫組化結果，分別分析兩組標本HMGA2與CDK6表達強度是否具有相關性。
　　結果：
　　在99例膀胱癌組織中，HMGA2與C

2、DK6表達呈中度正相關（r=0.5068，P<0.0001）；在高級別組中，HMGA2與CDK6表達呈中度正相關（r=0.5301，P=0.0022）；在低級別組中，HMGA2與CDK6表達呈低度正相關（r=0.3715，P=0.0018）；在高級別組中，二者表達相關性高于低級別組。
　　結論：
　　1.在99例膀胱癌組織中，HMGA2與CDK6表達呈中度正相關。
　　2.腫瘤惡性程度越高，HMGA2與CDK6在組織中

3、表達相關性越強
　　第二部分在膀胱癌細胞系中TGF-β1對HMGA2及CDK6表達的影響
　　目的：
　　在TGF-β1刺激后，檢測膀胱癌細胞HMGA2及CDK6的變化情況，并分析二者表達的關系；構建HMGA2過表達膀胱細胞株為進一步研究HMGA2與CDK6表達水平、細胞增殖以及細胞周期的關系做鋪墊。
　　方法：
　　TGF-β1分別刺激RT4和J82細胞株后，在不同濃度和不同時間分別利用RT-PCR及we

4、sternblot的方法檢測CDK6、HMGA2 mRNA水平及蛋白水平的表達量。將攜帶針對HMGA2及CDK6的shRNA的質粒瞬時轉染進入J82細胞后，經TGF-β1刺激后測定HMGA2及CDK6的表達量。
　　利用RT-PCR方法從基因組中將HMGA2 mRNA編碼蛋白序列擴增，將擴增的目的片段經T-A克隆載體導入pLVX-Tight-Puro質粒載體，經293T細胞包裝后，所得病毒轉染RT4細胞，經嘌呤霉素篩選后，得到改造

5、后的穩(wěn)定細胞株。利用CCK8方法檢測HMGA2過表達細胞株與對照組增殖情況，westernblot的方法檢測CDK6蛋白水平的表達量。利用PI染色流式細胞儀分析HMGA2過表達后細胞周期的變化情況。
　　結果：
　　經TGF-β1刺激后，RT4細胞在6小時時HMGA2及CDK6表達水平同時達到最大，在J82細胞中，經刺激后HMGA2及CDK6表達水平在24小時同時達到最大。同時HMGA2及CDK6的表達水平也隨TGF-β1的

6、濃度增加而增大。
　　在J82細胞中，當HMGA2被瞬時干擾后，CDK6表達也隨之下降，細胞周期被阻滯在G1期細胞增多（P<0.05）；HMGA2表達被干擾的細胞經TGF-β1刺激后，CDK6表達無明顯上升，G1期細胞百分比無明顯減少（P>0.05）。當CDK6被瞬時干擾后，HMGA2的表達不受影響。
　　RT4細胞過表達后，從第2天開始與對照組相比增殖速度加快（P<0.01），J82細胞HMGA2干擾后，從第2天開始較對照