西羅莫司對人子宮內(nèi)膜癌KLE細(xì)胞增殖及HIF-1a、mTOR基因及蛋白表達(dá)抑制作用的研究.pdf

1、目的：研究西羅莫司對體外缺氧培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系KLE細(xì)胞增殖及HIF-1a、mTOR基因及蛋白表達(dá)的抑制效應(yīng)，討論以mTOR蛋白為作用靶點(diǎn)治療子宮內(nèi)膜癌可能的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機(jī)制。
　　方法：用氯化鈷誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜腺癌KLE細(xì)胞模擬缺氧微環(huán)境，外源性給予不同濃度的西羅莫司分別作用于細(xì)胞24小時,48小時后，采用CCK-8法檢測KLE細(xì)胞活性變化。采用實時熒光定量PCR（Real-time PCR）法檢測西羅莫司對KLE細(xì)胞HIF

2、-1a、mTOR基因表達(dá)的影響。采用免疫熒光技術(shù)檢測不同濃度西羅莫司對KLE細(xì)胞內(nèi)HIF-1a、mTOR蛋白的變化。
　　結(jié)果：⑴西羅莫司可顯著抑制缺氧條件下人子宮內(nèi)膜癌 KLE細(xì)胞的增殖，其抑制率與藥物濃度呈劑量依賴性關(guān)系，而且48小時比24小時存活率低；10000nmol／L西羅莫司分別作用24小時和48小時后，缺氧條件下KLE細(xì)胞的存活率分別低至12％和9%。⑵在西羅莫司的干預(yù)下，隨著藥物作用濃度的增加，KLE細(xì)胞中mTOR

3、和HIF-1α mRNA和蛋白表達(dá)水平均呈下降趨勢，在其濃度最大組抑制效應(yīng)達(dá)到最大，實驗處理組與對照組比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。⑶HIF-1α蛋白主要定位在細(xì)胞核，而mTOR蛋白在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均有分布。其中在常氧對照組中HIF-1α蛋白表達(dá)檢測率較低，但在缺氧處理后 HIF-α表達(dá)顯著升高且有表達(dá)聚集的現(xiàn)象；mTOR蛋白在缺氧對照組細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)與常氧對照組相比無明顯差異；與缺氧對照組比較，缺氧加藥組隨著西羅莫司濃度增