X射線誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株MGR2放射抗拒分子機(jī)制的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:分子機(jī)制的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究本研究在蛋白質(zhì)組水平分析X射線誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株MGR2放射抗拒的分子機(jī)制，旨在分析不同放射敏感性的膠質(zhì)瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)組表達(dá)差異，為預(yù)測膠質(zhì)瘤放射治療反應(yīng)和放療增敏研究提供依據(jù)。 采用大劑量間歇照射的方法(2Gy 3次，5Gy、8Gy和10Gy各2次)誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系MGR2產(chǎn)生具有穩(wěn)定放射抗拒性的細(xì)胞亞系MGR2R52，分別測定MGR2和MGR2R52在2Gy照射后的生存率；提取MGR2

2、和MGR2R52及二者照射后繼續(xù)培養(yǎng)48h細(xì)胞的總蛋白，分別進(jìn)行cydye染料標(biāo)記和膠內(nèi)差異雙向電泳(2D-DIGE)分離；經(jīng)Typhoon 9400型多功能激光掃描儀不同波長的激光掃描后，獲取熒光膠內(nèi)差異表達(dá)圖譜，繼而采用Decyder軟件進(jìn)行圖譜分析；選取2D.DIGE圖譜中差異表達(dá)≥1.5倍且P值≤0.001的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，通過全自動斑點(diǎn)處理工作站切點(diǎn)、酶解和點(diǎn)樣后，使用基質(zhì)輔助激光解吸/電離-飛行時間質(zhì)譜儀(MALDI-TOF M

3、S)進(jìn)行蛋白質(zhì)的肽指紋圖譜(PMF)鑒定。 MGR2和MGR2R52的SF<,2>分別為0.1 92和0.579(P<0.001)；經(jīng)DeCyder軟件分析，MGR2與MGR2R52之間共有110個蛋白點(diǎn)強(qiáng)度差異≥1.5倍，其中MGR2在誘導(dǎo)后有26個蛋白表達(dá)下調(diào)，84個蛋白表達(dá)增加；MGR2在照射后48h蛋白質(zhì)表達(dá)無顯著變化；而MGR2R52在照射后48h有13個蛋白表達(dá)顯著增高。我們選取了75個與其他蛋白點(diǎn)充分分離的、邊界清

4、晰的蛋白點(diǎn)(有利于提高質(zhì)譜的鑒定率)，經(jīng)質(zhì)譜分析有26個蛋白點(diǎn)成功鑒定，共計23個蛋白包括：細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白如Vinculin、gelsolinisoform b、Unnamed protein product和SYNE1 protein；與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的熱休克蛋白如Heat shock 70kDa protein 4L；與RNA翻譯和蛋白質(zhì)合成有關(guān)的蛋白如upstream of NRASisoform 1和Tryptophanyl-T

5、ma synthetase；細(xì)胞內(nèi)吞有關(guān)的interferon-induced Mx protein和DYN2-HUMAN[AA 474-870]；與糖代謝有關(guān)的 UDP-N-acteylglucosaminepyrophosphorylase 1和Triosephosphate isomerase 1；與蛋白質(zhì)降解有關(guān)的ER.60 protein、ATPase(H+transporting，lysosomal 56/58kD，V1 s

6、ubunit B，isoform 2)、Proteasome activatorsubunit 2和Cathepsin D；與氧化還原有關(guān)的DERPl2(dermal papilla derived protein 12)、Biliverdin reductase A和peroxiredoxin 3 isoform b；酯酶如Esteterase D/formylglutathionehydrolase；還有MHC class Ⅰ an

7、tigen HLA-A2、KIAA0494 protein、Annexin I以及未知功能的蛋白如Hypothetical protein等。 1. MGR2R52細(xì)胞中Peroxiredoxin 3異構(gòu)體b、真皮乳頭衍生蛋白12和酯酶D表達(dá)增加，增加MGR2R52細(xì)胞照射后活性氧族的清除能力，有利于MGR2R52細(xì)胞照射后的存活； 2. MGR2R52細(xì)胞的糖代謝通路發(fā)生改變，促進(jìn)還原型輔酶Ⅱ NADPH的生成，增加為

8、過氧化物酶和谷胱甘肽等供氫，有利于活性氧的清除； 3. MGR2R52細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成和降解發(fā)生改變，其中溶酶體功能降低有利于減輕放射后Ⅱ型程序性死亡，而蛋白酶體通路的增強(qiáng)促進(jìn)了細(xì)胞抗原的表達(dá)，為膠質(zhì)瘤放療后聯(lián)合免疫治療提供了線索和依據(jù)； 4. MGR2R52細(xì)胞蛋白骨架增加有利于維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能的穩(wěn)定，為放射后的修復(fù)提供一個適宜的內(nèi)環(huán)境； 5． SYNE1在MGR2R52細(xì)胞2Gy照射后48h表達(dá)增加2倍以上，