VEGFR-1活化誘導上皮-間質表型轉化促進肝細胞癌侵襲轉移的研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文VEGFR1活化誘導上皮間質表型轉化促進肝細胞癌侵襲轉移的研究姓名：艾軍華申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（普外）指導教師：董家鴻20080501第三軍醫(yī)大學博士學位論文缺失，43例(43／82，5244％)呈正常陽性表達；Ncadherin有37例(37／82，4512％)表達陽性，Vimentin有44例(44／82，53。66％)表達陽性。統計分析顯示，上皮標志物Ecadherin、0【一catenin在肝癌

2、細胞膜上的表達下降或缺失，以及Ncadherin、Vimentin等間葉標志物在肝癌細胞漿中的陽性表達均與腫瘤分期、分化、腫瘤包膜和靜脈侵襲等臨床病理學因素顯著相關(P005)；統計分析還表明，VEGFR1表達與肝細胞癌的腫瘤分期、分化、靜脈侵襲和腫瘤包膜完整等侵襲轉移相關的病理學因素顯著相關(氏005)，并且與E—cadherin表達缺失和Vimentin、Ncadherin陽性表達相關(P005)；這就提示，在肝細胞癌中VEGFR1

3、促肝癌侵襲轉移的作用可能與誘導肝癌細胞發(fā)生上皮一間葉表型轉化(EMT)有關。2在檢測的四株人肝癌細胞MHCC97一H、MHCC97一L、SMMC7721、HepG2和正常人肝細胞株L一02中，具有轉移潛能的肝癌細胞株有VEGFR1mRNA和蛋白表達，而且VEGFR1的表達水平與肝癌細胞的侵襲轉移潛能呈正相關，即高轉移潛能的肝癌細胞其VEGFR一1的表達也高。在檢測的四株肝癌細胞中MHCC97H有100％發(fā)生肺轉移的潛能，其VEGFR1m

4、RNA和蛋白質表達水平也最高，因此完全可以用MHCC97一H作為下一步體外研究的靶細胞，以明確VEGFR1活化能否誘導肝癌細胞發(fā)生上皮一間葉表型轉化(EMT)。3VEGFB處理MHCC97H細胞48h后，細胞極性喪失，呈梭形、紡錘樣細胞形態(tài)，細胞一細胞間隙增寬說明細胞間粘附喪失，并且從細胞膜伸出偽足。而對照組細胞維持母細胞的上皮樣表型；給予VEGFR1的中和抗體18F1預處理后，VEGF—B刺激并不能改變MHCC97一H細胞形態(tài)，仍維持

5、母細胞的上皮樣表型，這初步提示VEGFR1活化可能誘導了肝癌細胞發(fā)生上皮間葉表型轉化(EMT)。通過RT—PCR、Westernblotting和細胞熒光免疫組化等方法進一步檢測了VEGFR1活化后肝癌細胞表型標志物表達的改變，發(fā)現實驗組細胞中上皮標志物Ecadherin和acatenin的表達水平顯著低于對照組，而且Ecadherin和0【catenin的表達部位也發(fā)生了改變，即在胞膜表達減少，胞漿中的表達增加；間質標志物Ncadhe

6、rin、Vimentin在實驗組細胞中的表達顯著高于對照組，Ncadherin、Vimentin在胞漿中的表達明顯增加；細胞遷移和細胞侵襲試驗結果顯示，VEGF—B處理MHCC97一H細胞后，細胞遷移和侵襲能力顯著高于對照組，說明VEGFR一1活化誘導肝癌細胞發(fā)生EMT后，增強了肝癌細胞的遷移和侵襲能力。實驗組給予VEGFR1的中和抗體18F1預處理后能夠阻斷上述效應的發(fā)生。這進一步提示，VEGFR1活化能誘導肝癌細胞發(fā)生EMT。4干預