siRNA抑制Aurora-A激酶的表達治療肝細(xì)胞肝癌的實驗研究.pdf

1、Aurora-A激酶是新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)中心體、微管功能的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在中心體成熟、紡錘體形成、染色體分離，即有絲分裂的正常進行中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。研究表明Aurora-A的過表達可導(dǎo)致中心體異常擴增，染色體的不穩(wěn)定和非整倍體細(xì)胞的形成并導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。 目前，Aurora-A已被認(rèn)為是一個與多種惡性腫瘤發(fā)生相關(guān)的癌基因。眾多研究發(fā)現(xiàn)，Aurora-A在乳腺癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、肺癌、膀胱癌等多種人類惡性腫瘤中高表

2、達。其表達水平與腫瘤的組織學(xué)分級、臨床分期和患者預(yù)后具有相關(guān)性。抑制Aurora-A激酶活性，可有效地阻礙細(xì)胞的生長、增殖，并引起腫瘤細(xì)胞的凋亡。 肝細(xì)胞肝癌(HepatocellularCarcinoma，HCC)是我國最常見的高發(fā)腫瘤之一，因其惡性程度高、易復(fù)發(fā)、易轉(zhuǎn)移，故預(yù)后差、死亡率高。盡管目前對于HCC的治療方案日趨完善，但仍難取得令人滿意的療效。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞染色體20q區(qū)域常常存在擴增，而該區(qū)域正是Au

3、rora-A基因位置所在，從而高度提示HCC的發(fā)生可能和Aurora-A表達異常有關(guān)。 本課題將分為3部分對Aurora-A和HCC的關(guān)系進行研究： 1.應(yīng)用Real-Time實時定量PCR檢測Aurora-A在HCC患者腫瘤組織及癌旁正常組織中mRNA的表達差異，并分析其表達水平與各種臨床病理指標(biāo)和預(yù)后的相關(guān)性； 2.應(yīng)用RNA干擾技術(shù)體外沉默HepG2等肝癌細(xì)胞株Aurora-A基因，觀察肝癌細(xì)胞增殖、凋亡、

4、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的改變；3.深入探討抑制Aurora-A表達影響肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的內(nèi)在機制。 研究發(fā)現(xiàn)，50％(16/32)的HCC患者肝癌組織Aurora-AmRNA表達量明顯高于癌旁正常對照組織，兩者的差異從1.6倍至148倍不等，且Aurora-AmRNA高表達與患者的年齡、性別、乙肝病毒的感染以及術(shù)前AFP水平及腫瘤的大小、組織學(xué)分級無明顯相關(guān)，而和TNM分期顯著相關(guān)。另外，生存分析發(fā)現(xiàn)Aurora-AmRNA高表

5、達患者的預(yù)后較差。進而應(yīng)用RNA干擾抑制Aurora-A在HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721三種肝癌細(xì)胞株中的表達，MTT實驗發(fā)現(xiàn)三種肝癌細(xì)胞株的生長均受到不同程度的抑制，且表現(xiàn)為一定的時間依賴性；流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯并發(fā)生凋亡；此外，HepG2細(xì)胞經(jīng)過Aurora-ARNA干擾后體外遷移和侵襲能力下降，表現(xiàn)為劃痕愈合不良以及穿越Matrigel基質(zhì)膠能力減弱。對抑制Aurora-A表達體外改變肝癌細(xì)胞

6、生物學(xué)行為的機制研究發(fā)現(xiàn)，Aurora-ARNA干擾下調(diào)CyclinB1表達導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯；同時Aurora-A表達受抑解除了其在過表達狀態(tài)下對野生型p53(wt-p53)的抑制作用，恢復(fù)了wt-p53的正常作用，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，下調(diào)MMP-9表達，抑制細(xì)胞侵襲能力。 綜上所述，我們認(rèn)為Aurora-A與肝癌細(xì)胞的各種生物學(xué)行為關(guān)系密切，其在肝癌組織中的高表達將直接影響HCC患者的預(yù)后。隨著對Aurora-A的功能及其