卵巢上皮癌耐泰素和非耐泰素細胞間差異表達基因與蛋白篩選鑒定研究.pdf

1、為了更好的認識卵巢癌的多藥耐藥機制，我們用泰素對卵巢卵巢漿液性乳頭狀腺癌細胞SKOV3進行間斷、大劑量沖擊，建立了卵巢癌耐藥細胞株SKOV3/TS，并且從蛋白和基因兩個水平篩選、鑒定了兩種細胞間的差異蛋白分子。 第一部分：卵巢上皮癌泰素耐藥細胞株相關生物學指標的檢測驗證研究 目的：對泰素耐藥細胞株SKOV3frs進行相關生物學指標的檢測驗證。方法：MTT法檢測SKOV3/TS對泰素的耐藥指數(shù)及對健擇、奧沙利鉑、米托蒽醌、

2、VP-16、異環(huán)磷酰胺的交叉耐藥性；采用21天細胞計數(shù)法繪制細胞的生長曲線并計算其倍增時間。結(jié)論：SKOV3/TS表現(xiàn)出典型的多藥耐藥特征，該耐藥模型十分穩(wěn)定達到了后續(xù)的蛋白和基因?qū)嶒灥膶嶒炓蟆?第二部分：卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細胞間差異表達蛋白篩選鑒定研究研究 目的：比較卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細胞間的蛋白表達差異，并進行相關蛋白的篩選和鑒定。方法：提取卵巢癌耐泰素細胞SKOV3frs和親本細胞SKOV

3、3的總蛋白，用蛋白二維液相分離色譜技術(shù)(ProtemeLabTM PF-2D)對總蛋白進行分級分離，然后用其自帶的Proteovue和Deltavue分析軟件進行兩種細胞間差異蛋白的篩選； 用電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MS/MS)結(jié)合數(shù)據(jù)庫比對進行差異蛋白的鑒定。結(jié)果：共分離篩選出差異蛋白12個，其中SKOV3/TS表達上調(diào)的12個，SKOV3表結(jié)論：PF-2D結(jié)合ESI-MS/MS是一種進行能夠差異蛋白篩選、鑒定的有效方法

4、。鑒定出的蛋白通過多種復雜機制介導了卵巢癌對泰素類的耐藥性的產(chǎn)生，這些蛋白有可能成為療效預測分子或新的治療靶標。 第三部分：卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細胞間差異表達基因篩選鑒定研究研究 目的：比較卵巢上皮癌耐泰素類和非耐泰素類細胞間的基因表達差異，并進行相關基因的篩選和鑒定。方法：采用人類全基因組表達譜芯片對卵巢癌耐泰素細胞SKOV3/TS和親本細胞SKOV3進行差異基因的篩選和分析；用熒光定量RT-PCR對芯片結(jié)果