馬索羅酚(NDGA)對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦髓炎小鼠炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(MS)是一種以炎性脫髓鞘和軸索損傷為特征的免疫介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。多發(fā)性硬化的病因和機(jī)制尚不明確，但炎癥是這個(gè)疾病早期最重要的環(huán)節(jié)。各種細(xì)胞因子以自分泌或旁分泌方式，組成了一個(gè)復(fù)雜的動(dòng)態(tài)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，參與了免疫反應(yīng)的所有過(guò)程及階段，在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和組織修復(fù)中起著關(guān)鍵性作用，決定著多發(fā)性硬化的病情嚴(yán)重程度及發(fā)展趨勢(shì)。我們課題組前期對(duì)Nrf2通路激活劑萊菔硫烷的研究中發(fā)現(xiàn)其增強(qiáng)小鼠抗氧化應(yīng)激能力和調(diào)節(jié)免疫機(jī)制，在實(shí)驗(yàn)性自身

2、免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠中起到神經(jīng)保護(hù)作用。然而萊菔硫烷尚未應(yīng)用于臨床，通過(guò)文獻(xiàn)查閱，我們發(fā)現(xiàn)了可應(yīng)用于人體的Nrf2通路激活劑——馬索羅酚。馬索羅酚在MS的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用尚未明確，需要進(jìn)一步的研究。本實(shí)驗(yàn)以馬索羅酚作為干預(yù)藥物，觀察EAE小鼠及馬索羅酚治療小鼠發(fā)病嚴(yán)重程度及病程的影響。研究馬索羅酚對(duì)EAE小鼠IL-4、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TGF-β表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。進(jìn)而探索相關(guān)細(xì)胞因子在EAE病程中的

3、作用，并研究馬索羅酚在EAE免疫學(xué)機(jī)制中是否發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法:將54只8至10周雌性C57BL/6小鼠，體重18g至20g，隨機(jī)分成control組、EAE組和NDGA組，各組分別為18只。每組分為2個(gè)亞組，10天組及20天組，各亞組為9只。建立EAE動(dòng)物模型。NDGA組小鼠自發(fā)病（weaver評(píng)分≥1分）當(dāng)天（記為第0天），每只每日腹腔注射NDGA溶液10mg/kg。EAE組及control組小鼠自第0天，每只每日腹

4、腔注射5％DMSO10ml/kg。每日一次，直至處死。每天2次對(duì)其進(jìn)行稱重和神經(jīng)功能的評(píng)分。利用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)脊髓及脾中IL-4、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、 TGF-β表達(dá)水平，用ELISA方法檢測(cè)腦組織中IL-4、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TGF-β表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、在發(fā)病第10天及第20天，NDGA組平均神經(jīng)功能評(píng)分均較EAE組顯著降低(P＜0.05)。

5、>　　2、各組小鼠脊髓及脾組織中IL-4、IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γTGF-β的mRNA水平:
　　在發(fā)病10天時(shí)，與Control組對(duì)比，EAE組IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ mRNA水平均增高，NDGA組IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ mRNA水平較EAE組低，并有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。EAE組TGF-β、IL-4mRNA水平降低，NDGA組TGF-β、IL-4 mRNA水平

6、較EAE組高，并有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。
　　在發(fā)病20天時(shí)，與Control組對(duì)比，EAE組IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ mRNA水平均增高，NDGA組IL-12、IL-17、IFN-γ mRNA表達(dá)較EAE組低，并有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。EAE組TGF-β、IL-4 mRNA水平降低，NDGA組TGF-βmRNA水平較EAE組高，并有統(tǒng)計(jì)差異（P＜0.05）。
　　3、各組小鼠腦組織中IL-4、I

7、L-6、IL-12、IL-17、IFN-γ、TGF-β含量變化情況:
　　在發(fā)病10天時(shí)，與Control組對(duì)比，EAE組IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ的表達(dá)均增高，NDGA組IL-6、IL-12、IL-17、IFN-γ的表達(dá)較EAE組低，并有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。EAE組TGF-β、IL-4的表達(dá)降低，NDGA組TGF-β、IL-4的表達(dá)較EAE組高，并有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。
　　在發(fā)病20天時(shí)，與

8、Control組對(duì)比，EAE組IL-17、IFN-γ的表達(dá)均增高，NDGA組IL-17、IFN-γ表達(dá)較EAE組低，并有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.05)。NDGA組TGF-β的表達(dá)較EAE組高，并有統(tǒng)計(jì)差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、EAE的發(fā)病和緩解與炎癥因子的動(dòng)態(tài)變化相關(guān)。
　　2、NDGA可以減輕EAE小鼠神經(jīng)功能損害嚴(yán)重程度，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，對(duì)EAE小鼠具有保護(hù)作用。
　　3、NDGA可以降低EAE