龍眼胚胎發(fā)育相關(guān)基因F3H和FRK的克隆與分析.pdf

1、本研究以“立冬本”龍眼合子胚為材料，采用RT-PCR和RACE技術(shù)，克隆了龍眼胚胎F3H基因cDNA全長和FRK基因cDNA片段，并對F3H基因進(jìn)行了原核表達(dá)的研究和序列分析，對揭示龍眼胚胎發(fā)育與分化的分子本質(zhì)，對進(jìn)一步利用基因工程技術(shù)培育優(yōu)質(zhì)果奠定實驗基礎(chǔ)。主要實驗結(jié)果如下： 1采用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆了龍眼胚胎F3H基因cDNA全長龍眼胚胎F3H基因cDNA全長為1404bp，其中包含119 bp的5'非編碼區(qū)和1

2、87 bp的3'非編碼區(qū)，編碼365個氨基酸，等電點為5.55，分子量為41.112kDa。對龍眼胚胎F3H基因cDNA編碼產(chǎn)物進(jìn)行分析，推斷龍眼胚胎F3H基因為親水性多肽。將該F3H基因cDNA序列與其它植物F3H基因cDNA進(jìn)行比較，結(jié)果表明，龍眼胚胎F3H基因cDNA序列與許多植物的F3H'基因具有很高的同源性，與棉花F3H的同源性達(dá)84％，與柑橘F3H的同源性達(dá)82％，與草莓F3H的相似系數(shù)達(dá)83％，對其所推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行分

3、析發(fā)現(xiàn)，龍眼F3H的氨基酸序列與棉花F3H同源性最高，達(dá)90.76％，與葡萄的同源性達(dá)89.04％，與柑橘的同源性達(dá)88.49％。該基因在GenBank中登錄號為EF468104。 2龍眼胚胎F3H基因cDNA的原核表達(dá)將分離出來的龍眼胚胎F3H基因cDNA的編碼區(qū)序列插入pET-29a載體上構(gòu)建原核表達(dá)載體，在細(xì)菌BL21細(xì)胞中進(jìn)行原核表達(dá)。試驗結(jié)果顯示，該編碼區(qū)片段在原核細(xì)胞中不表達(dá)。推測是由于表達(dá)質(zhì)粒和表達(dá)宿主菌選擇不當(dāng)，