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文檔簡(jiǎn)介
1、丘腦前核(anterior thalamic nuclei,ATN)是背側(cè)丘腦的重要組成部分,它由三個(gè)亞核組成,分別為丘腦前核背側(cè)核(AD),丘腦前核腹側(cè)核(AV)及丘腦前核內(nèi)側(cè)核(AM),其功能與空間學(xué)習(xí)記憶相關(guān)。磷酸化的環(huán)磷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(P-CREB)作為一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子在空間學(xué)習(xí)與記憶的過(guò)程中也發(fā)揮著非常重要的作用。
目的:本實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)和免疫組織化學(xué)技術(shù),通過(guò)觀察磷酸化的環(huán)磷酸反應(yīng)
2、元件結(jié)合蛋白在大鼠丘腦前核的表達(dá)和分布情況,從而進(jìn)一步研究并闡述P-CREB與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系,進(jìn)而為P-CREB參與大鼠丘腦前核的學(xué)習(xí)記憶提供更新穎前沿的資料。
方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用成年Wistar大鼠30只,雄性,體重200-250g。進(jìn)行為期5天的Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后經(jīng)乙醚及4%水合氯醛腹腔注射麻醉,固定大鼠,暴露大鼠心臟,將灌注針頭經(jīng)左心室插入至升主動(dòng)脈進(jìn)行灌注。灌注完畢立即取腦,置于4%多聚甲醛固定液中4℃過(guò)夜
3、。次日使用震動(dòng)切片機(jī)連續(xù)冠狀切片,片厚30μm。使用anti-CREB抗體作為標(biāo)記物,采用免疫組化SABC法染色,在光鏡下觀察P-CREB在學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中在丘腦前核內(nèi)的表達(dá)及分布情況,所有標(biāo)本均采用同一套圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照及分析,所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行配對(duì)資料t檢驗(yàn)。Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間逃避潛伏期比較采用單因素重復(fù)測(cè)量方差分析。
結(jié)果:1.Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組大鼠在經(jīng)
4、過(guò)為期4天的空間定位航行實(shí)驗(yàn)后,第2,3,4天的“逃避潛伏期”與第一天的“逃避潛伏期”比較有顯著的縮短(P<0.05),說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組大鼠具備一定的空間學(xué)習(xí)記憶能力,隨著空間定位航行訓(xùn)練次數(shù)的增多,大鼠的空間學(xué)習(xí)能力將會(huì)提高,并且通過(guò)空間定位的學(xué)習(xí)成功建立了空間定位的學(xué)習(xí)記憶動(dòng)物模型。
2.磷酸化的環(huán)磷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白免疫組織化學(xué)結(jié)果:在光鏡下可以看到P-CREB的陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞核內(nèi),主要呈圓形和橢圓形,并且在AV和AD區(qū)均有
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