學(xué)習(xí)記憶中磷酸化的CREB在大鼠丘腦前核內(nèi)的表達(dá).pdf

1、丘腦前核（anterior thalamic nuclei，ATN）是背側(cè)丘腦的重要組成部分，它由三個亞核組成，分別為丘腦前核背側(cè)核(AD)，丘腦前核腹側(cè)核(AV)及丘腦前核內(nèi)側(cè)核(AM)，其功能與空間學(xué)習(xí)記憶相關(guān)。磷酸化的環(huán)磷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(P-CREB)作為一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子在空間學(xué)習(xí)與記憶的過程中也發(fā)揮著非常重要的作用。
　　目的:本實驗研究應(yīng)用Morris水迷宮行為學(xué)實驗和免疫組織化學(xué)技術(shù)，通過觀察磷酸化的環(huán)磷酸反應(yīng)

2、元件結(jié)合蛋白在大鼠丘腦前核的表達(dá)和分布情況，從而進(jìn)一步研究并闡述P-CREB與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系，進(jìn)而為P-CREB參與大鼠丘腦前核的學(xué)習(xí)記憶提供更新穎前沿的資料。
　　方法:實驗動物采用成年Wistar大鼠30只，雄性，體重200-250g。進(jìn)行為期5天的Morris水迷宮行為學(xué)實驗后經(jīng)乙醚及4％水合氯醛腹腔注射麻醉，固定大鼠，暴露大鼠心臟，將灌注針頭經(jīng)左心室插入至升主動脈進(jìn)行灌注。灌注完畢立即取腦，置于4％多聚甲醛固定液中4℃過夜

3、。次日使用震動切片機連續(xù)冠狀切片，片厚30μm。使用anti-CREB抗體作為標(biāo)記物，采用免疫組化SABC法染色，在光鏡下觀察P-CREB在學(xué)習(xí)記憶過程中在丘腦前核內(nèi)的表達(dá)及分布情況，所有標(biāo)本均采用同一套圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照及分析，所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行配對資料t檢驗。Morris水迷宮行為學(xué)實驗中實驗組不同時間逃避潛伏期比較采用單因素重復(fù)測量方差分析。
　　結(jié)果:1.Morris水迷宮行為學(xué)實驗結(jié)果:實驗組大鼠在經(jīng)

4、過為期4天的空間定位航行實驗后，第2，3，4天的“逃避潛伏期”與第一天的“逃避潛伏期”比較有顯著的縮短(P＜0.05)，說明實驗組大鼠具備一定的空間學(xué)習(xí)記憶能力，隨著空間定位航行訓(xùn)練次數(shù)的增多，大鼠的空間學(xué)習(xí)能力將會提高，并且通過空間定位的學(xué)習(xí)成功建立了空間定位的學(xué)習(xí)記憶動物模型。
　　2.磷酸化的環(huán)磷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白免疫組織化學(xué)結(jié)果:在光鏡下可以看到P-CREB的陽性表達(dá)位于細(xì)胞核內(nèi)，主要呈圓形和橢圓形，并且在AV和AD區(qū)均有