人紅細胞膜上以帶3蛋白為核心的蛋白質(zhì)復合體研究.pdf

1、帶3蛋白(Band3)是人紅細胞膜上最主要的蛋白質(zhì)，其基因位于第17號染色體的q21-q22區(qū)段。生物膜膜脂主要分為三類：甘油磷脂，鞘脂以及膽固醇.脂筏的蛋白質(zhì)大多與信號轉導相關，其特有的蛋白主要有三大類：caveolin、flotillin和stomatin。帶3蛋白是紅細胞膜上最主要的蛋白，而flotillin是紅細胞脂筏上最主要的蛋白.為了研究以帶3蛋白為核心的膜蛋白復合體，本文首先建立了可靠的invitro實驗系統(tǒng)，將重點轉向克

2、隆和表達cdb3，并成功地表達了5種融合了不同接頭的重組cdb3。經(jīng)過優(yōu)化表達條件，并通過離子交換層析、親和層析和分子篩純化，得到了大量純度超過98％的重組蛋白。通過SDS-PAGE和Westernblot，我們驗證了重組cdb3的濃度和純度；通過質(zhì)譜實驗，精確測定了重組cdb3的分子量；通過cdb3的pH依賴性蛋白質(zhì)內(nèi)稟熒光實驗，證實了重組cdb3的結構和從人紅細胞膜上提取的cdb3類似；通過與protein4.2C3片段的pull-

3、down實驗，發(fā)現(xiàn)重組蛋白和從紅細胞中提取的cdb3活性相似；通過與ankyrinD34片段的pull-down實驗，證實了重組cdb3和ankyrin的相互作用也受pH調(diào)控，且不受溶液的離子強度影響。隨后通過pull-down實驗和二維電泳，得到了和重組cdb3相互作用的紅細胞膜蛋白譜。除此之外，我們還選取了一些特定蛋白，進行了原核表達，并初步研究了它們與帶3蛋白或cdb3之間的相互作用。我們的研究從一個側面證明了cdb3能與多種蛋白