VEGF-165與Matrigel基底膜基質(zhì)模擬神經(jīng)新生微環(huán)境對海馬神經(jīng)干細胞的作用.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)干細胞移植為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷提供了新的治療途徑，但近年來研究發(fā)現(xiàn)，外源性神經(jīng)干細胞移植存在著神經(jīng)于細胞存活率低，向神經(jīng)元分化較少等問題。而血管-神經(jīng)新生的概念以及神經(jīng)新生微環(huán)境的提出為解決這些問題提供了新的方向。本次實驗通過新生大鼠提取神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)為基礎(chǔ)，探討VEGF-165與Matrigel基底膜基質(zhì)模擬神經(jīng)新生微環(huán)境對神經(jīng)干細胞生長、分化的作用。
　　研究方法：
　　本次研究以新生24小時內(nèi)的

2、SD大鼠為神經(jīng)干細胞供體，通過提取海馬組織中神經(jīng)干細胞進行體外培養(yǎng)，并以巢蛋白nestin免疫組化染色進行鑒定。將培養(yǎng)成功的神經(jīng)干細胞分別接種于多聚賴氨酸包被的24孔板和Matrigel基底膜基質(zhì)中，并分別給予正常神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基，胎牛血清誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，VEGF-165誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基和VEGF+血清誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基進行培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)分化一周后通過免疫熒光染色法，對誘導(dǎo)后的細胞進行nestin蛋白、β-tubulinⅢ蛋白和GFAP

3、蛋白檢測，觀察各誘導(dǎo)組的三種蛋白陽性細胞比例，并對比Matrigel基底膜基質(zhì)應(yīng)用前后的細胞分化情況，以明確VEGF-165和Matrigel基底膜基質(zhì)的應(yīng)用以及兩者聯(lián)合作用對于神經(jīng)干細胞生長分化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.神經(jīng)干細胞培養(yǎng):經(jīng)新生大鼠海馬組織進行神經(jīng)干細胞提取，經(jīng)體外培養(yǎng)1周后形成約幾百細胞形成的細胞球，經(jīng)胰酶與機械分離法結(jié)合將細胞球吹散以進行傳代，傳代后細胞生長良好，可穩(wěn)定傳代。行nestin免疫組化染色

4、后，培養(yǎng)所的細胞球絕大多數(shù)染色呈強陽性反應(yīng)。因此，經(jīng)新生大鼠海馬區(qū)提取培養(yǎng)所得的細胞是神經(jīng)干細胞。
　　2.VEGF-165誘導(dǎo)分化:通過不同的培養(yǎng)基配置方案誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞的生長與分化，可以得出VEGF-165對于神經(jīng)干細胞生長分化的大致作用，即促VEGF-165在神經(jīng)干細胞的增殖與分化中可起調(diào)控作用，能促進NSCs的增殖與分化，并可能存在誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元方向分化作用。因此，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)可能是神經(jīng)干細胞增殖與分

5、化的促進因素，對于研究神經(jīng)干細胞生成及分化具有重要意義。
　　3.Matrigel基底膜基質(zhì)與VEGF-165聯(lián)合作用:Matrigel基底膜基質(zhì)可以為神經(jīng)干細胞增殖與分化提供理想的三維立體培養(yǎng)環(huán)境，并能促進神經(jīng)干細胞的分化，與VEGF-165聯(lián)合應(yīng)用可以提高神經(jīng)元的分化比例，且使細胞間形成更近似于在體組織的結(jié)構(gòu)，對于神經(jīng)再生有著重要意義。
　　結(jié)論：
　　利用血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-165)和Matrigel基底