河北道地藥材連翹質(zhì)量控制與金盞花藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、中藥連翹為木犀科植物連翹(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果實(shí)，為河北道地藥材，具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效。化學(xué)成分包括苯乙醇苷類、木脂素類、五環(huán)三萜類和揮發(fā)油類等，其中苯乙醇苷類和木脂素類成分為其發(fā)揮藥效的主要物質(zhì)。由于受地理因素和生長(zhǎng)環(huán)境的影響，不同產(chǎn)地連翹藥材的化學(xué)成分及其含量不盡相同，造成藥材質(zhì)量的不穩(wěn)定。本研究建立了河北道地藥材連翹的HPLC指紋圖譜和HPCE指紋圖譜，為連翹藥材的質(zhì)量控制與

2、評(píng)價(jià)提供科學(xué)的方法。建立了HPLC法、HPCE法和HPLC-ESI-MS法同時(shí)測(cè)定連翹中有效成分含量的方法，為連翹藥材的質(zhì)量控制提供更豐富的依據(jù)。
　　 中藥金蓮花為毛莨科植物金蓮花(TrolliuschinensisBunge)的干燥花，具有抗菌、抗病毒等活性，廣泛用于治療感冒、發(fā)燒、慢性扁桃體炎、急性鼓膜炎、尿路感染和其他炎癥。藥理學(xué)研究表明金蓮花的主要活性成分為黃酮苷類。本研究在本科室研究結(jié)果的基礎(chǔ)上建立了HPLC-ESI

3、-MS法研究大鼠口服金蓮花提取物后3種黃酮苷類成分的藥代動(dòng)力學(xué)特征，為該藥的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。第一部分河北道地藥材連翹的高效液相色譜指紋圖譜研究目的：建立河北道地藥材連翹的HPLC-PDA指紋圖譜，得到對(duì)照?qǐng)D譜，與不同產(chǎn)地、不同采收部位連翹藥材指紋圖譜相比較，并測(cè)定各批藥材中連翹苷和蘆丁的含量，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制連翹藥材質(zhì)量提供方法。
　　 方法：色譜柱為DiamonsilrMC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)

4、相為乙腈-0.1％磷酸溶液進(jìn)行梯度洗脫，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm，流速0.8mL/min，含量測(cè)定中連翹苷與蘆丁的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為210nm和254nm，流速1.0mL/min。
　　 結(jié)果：建立了河北省連翹藥材HPLC-PDA指紋圖譜共有模式，對(duì)不同產(chǎn)地、不同采收部位藥材進(jìn)行了相似度比較，并測(cè)定了29批藥材中連翹苷和蘆丁的含量。結(jié)果表明河北產(chǎn)連翹藥材質(zhì)量穩(wěn)定，山西、河南產(chǎn)連翹藥材相似度也很高。不同部位連翹藥材相似度差異

5、較大，連翹葉和花中連翹苷和蘆丁含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于果實(shí)。
　　 結(jié)論：本文建立了河北道地藥材連翹的HPLC-PDA指紋圖譜，方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，為連翹藥材的鑒別和全面質(zhì)量控制提供了依據(jù)。另外，連翹葉和花中連翹苷和蘆丁含量非常高，對(duì)于葉和花能否替代果實(shí)或與果實(shí)合并用藥有待于進(jìn)一步研究。第二部分河北道地藥材連翹的高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜研究目的：建立河北道地藥材連翹的高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜，并與不同產(chǎn)地、不同采收部位連翹藥材指紋圖譜相比

6、較。建立同時(shí)測(cè)定連翹中連翹苷、連翹脂素、(+)-表松脂素-4'-O-葡萄糖苷、(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷和(+)-表松脂素5種木脂素類成分的區(qū)帶毛細(xì)管電泳法，并測(cè)定各批連翹藥材中5種成分的含量。
　　 方法：石英毛細(xì)管柱（75μm×60cm，有效長(zhǎng)度30cm）作為分離通道，以50mmol/L硼砂（用0.1mol/LNaOH調(diào)pH至9.90）為電泳緩沖液，工作電壓15kV，溫度20℃，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，按此條件對(duì)不同產(chǎn)地、

7、不同采收部位藥材進(jìn)行了比較評(píng)價(jià)和含量測(cè)定。
　　 結(jié)果：建立了河北連翹藥材高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜共有模式，確定了12個(gè)共有峰。河北產(chǎn)連翹藥材指紋圖譜較相似，山西、河南產(chǎn)連翹與河北連翹質(zhì)量相近，不同部位連翹藥材化學(xué)成分差異較大。含量測(cè)定結(jié)果表明5種木脂素類成分在12.5min內(nèi)實(shí)現(xiàn)良好分離，連翹葉和花中連翹苷、連翹脂素、(+)-表松脂素-4'-O-葡萄糖苷和(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷的含量均高于果實(shí)。
　　 結(jié)論：本

8、文建立了河北道地藥材連翹的HPCE指紋圖譜，建立了同時(shí)測(cè)定連翹中連翹苷、連翹脂素、(+)-表松脂素-4'-O-葡萄糖苷、(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷和(+)-表松脂素5種木脂素類成分的區(qū)帶毛細(xì)管電泳法。方法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確可靠，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制連翹藥材質(zhì)量提供新方法。對(duì)于葉和花的藥用價(jià)值有待于進(jìn)一步研究。第三部分HPLC-ESI-MS法同時(shí)測(cè)定連翹中14種化學(xué)成分的含量目的：建立同時(shí)測(cè)定連翹中14種化學(xué)成分含量的HPLC-ESI-

9、MS法，并測(cè)定不同產(chǎn)地和采收部位連翹藥材中14種成分的含量。為全面控制連翹藥材質(zhì)量提供新方法。
　　 方法：色譜條件：KromasilC18色譜柱（150mm×4.6mm,5μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.1％甲酸進(jìn)行梯度洗脫，流速0.7mL/min，進(jìn)樣量5μL。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子化源(ESI)；負(fù)離子方式檢測(cè)；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)；源噴射電壓(IS)為-4500v；霧化溫度為600℃：霧化氣(GS1,N2)壓力

10、為40psi；輔助氣(GS2,N2)壓力為50psi；氣簾氣(N2)壓力為25psi。
　　 結(jié)果：14種成分的線性關(guān)系良好（r＞0.9990），日內(nèi)和日間精密度(RSD)在0.7％和4.3％之間，平均回收率在96.65％和101.2％之間。連翹果實(shí)中連翹酯苷含量最高，不同產(chǎn)地藥材中各個(gè)成分的含量均有一定程度的差異。連翹葉和花中大部分成分的含量均遠(yuǎn)高于果實(shí)。
　　 結(jié)論：本文首次建立了HPLC-ESI-MS同時(shí)測(cè)定連翹中

11、14種化學(xué)成分含量的方法，該方法快速，靈敏度高，特異性強(qiáng)，隨著液質(zhì)聯(lián)用儀的普及，將成為控制連翹藥材質(zhì)量的有效方法。第四部分HPLC-ESI-MS法研究大鼠口服金蓮花提取物后3種化學(xué)成分的藥代動(dòng)力學(xué)特征目的：建立HPLC-ESI-MS同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中葒草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷濃度的方法，并用于大鼠口服金蓮花提取物后這3種成分的藥動(dòng)學(xué)研究。
　　 方法：大鼠口服金蓮花提取物2mL，分別于給藥后5，10,15

12、,25,40,55,70,90,120,180,270和390min由眼眶靜脈取血0.3mL，收集于肝素化的離心管中，甲醇沉淀蛋白。色譜條件：WatersSunFireTMC18色譜柱(150mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.01％甲酸梯度洗脫(0-3min,30％-90％甲醇；8.1min,30％甲醇)，流速為0.7mL/min，進(jìn)樣量為5μL。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子化源(ESI)；負(fù)離子方式檢測(cè)；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（M

13、RM）；源噴射電壓(IS)為-5000v；霧化溫度為600℃；霧化氣(GS1,N2)壓力為40psi；輔助氣(GS2,N2)壓力為40psi；氣簾氣(N2)壓力為25psi。
　　 結(jié)果：葒草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷在4.5-4200ng/mL,6.5-6200ng/mL和2-800ng/mL的濃度范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系。日內(nèi)和日間精密度(RSD)在1.7％和10.8％之間，準(zhǔn)確度（RE）在-5.1％和5.0

14、％之間。提取回收率在97.30％和106.7％之間，基質(zhì)效應(yīng)在95.80％和101.7％之間。葒草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：T1/2分別為82.84±11.50，82.57±7.61和71.16±8.57min，AUC0-t分別為285.4±29.3，152.8±15.2和10.3±1.3μgmin/mL，AUC0分別為313.8±27.8，167.6±24.7和10.8±1.2μgmin/mL，M